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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr, 电泳,DNA条带
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qinbanruo

新虫 (正式写手)

[求助] pcr, 电泳,DNA条带 已有3人参与

pcr后，电泳跑出来的DNA条带很弱，是怎么问题？

pcr, 电泳,DNA条带


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-04-07 13:29:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:39:58
我也出过这样的情况，DNA浓度没问题，PCR后有一半的条带不亮。可能是引物和DNA匹配有些差异，比如说我的引物完全按A种青霉DNA设计的，但是PCR的这个DNA是B种青霉的。
你的这个很正常吧，产物分子量很小。溶胶和跑胶严格按照标准来做会好些。
我是同时把循环数+5，引物量加倍，最后做出的图形很漂亮。
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坚持！
2楼2017-04-07 16:23:38
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:40:14
引物二聚体很亮，建议减少引物、提高退火温度
条带太弱，建议适当增加循环、增加模板量或者降低退火温度
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3楼2017-04-07 22:23:28
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流水青苔

木虫 (著名写手)
楼主有空的话，可以做下这样的实验吗？假设现在退火温度为55度，①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿喷，纯属个人想知道结果，如有问题望指正。

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4楼2017-04-07 23:25:47
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普通回帖

luil121

银虫 (小有名气)
如果是跑胶后染色的话可以考虑下配置新的染液

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5楼2017-04-08 00:22:43
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

marker亮不啊 换实验室后发现电泳仪器，染色试剂也很关键
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6楼2017-04-10 13:30:28
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qinbanruo

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stabilized at 2017-04-07 16:23:38
我也出过这样的情况，DNA浓度没问题，PCR后有一半的条带不亮。可能是引物和DNA匹配有些差异，比如说我的引物完全按A种青霉DNA设计的，但是PCR的这个DNA是B种青霉的。
你的这个很正常吧，产物分子量很小。溶胶和跑胶 ...

嗯嗯，好的，谢谢~有的时候还会出现不出条带的问题

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7楼2017-04-13 10:10:05
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qinbanruo

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2017-04-07 22:23:28
引物二聚体很亮，建议减少引物、提高退火温度
条带太弱，建议适当增加循环、增加模板量或者降低退火温度

好的，谢谢~~

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8楼2017-04-13 10:10:21
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qinbanruo

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 流水青苔 at 2017-04-07 23:25:47
楼主有空的话，可以做下这样的实验吗？假设现在退火温度为55度，①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿喷，纯属个人想知 ...

五个循环会不会太少了？？？

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9楼2017-04-13 10:11:30
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qinbanruo

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yingxiaoying at 2017-04-10 13:30:28
marker亮不啊 换实验室后发现电泳仪器，染色试剂也很关键

marker 很亮，这些应该都没很大问题，师兄他们也在用，跑出来的带蛮好的

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10楼2017-04-13 10:12:48
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