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summit061800

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR，电泳 已有2人参与

PCR产物跑电泳后，在上样孔下有浅浅的条带，感觉像没有反应的DNA，请问这是什么原因导致的？再一个问题，我最近做的PCR总是一次一个结果，平大家帮我分析分析原因，多谢

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1楼 2014-04-24 21:59:49
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
summit061800(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-25 18:53:03
1、上样孔下有浅浅的条带，可能是你DNA模版加量太多，或者你的加样孔不干净。
2、做的PCR总是一次一个结果，你是指P出来的条带大小不对？如果大小不对，可能Marker过期了，可能与你配胶浓度有关，请问你电泳跑出的条带有拖曳吗？有拖曳的话，可能是你的体系被污染了
希望对你有帮助。
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2楼2014-04-25 17:29:51
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summit061800

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-04-25 17:29:51
1、上样孔下有浅浅的条带，可能是你DNA模版加量太多，或者你的加样孔不干净。
2、做的PCR总是一次一个结果，你是指P出来的条带大小不对？如果大小不对，可能Marker过期了，可能与你配胶浓度有关，请问你电泳跑出的 ...

谢谢，没有托尾现象。我没有表达清楚，我所说的一次一个结果是这样的，A样品今天有目的条带，明天再做A就没有了，B样品C样品可能又出现目的条带了，难道是我的引物特异性不好么？

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3楼2014-04-27 03:06:24
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by summit061800 at 2014-04-27 03:06:24
谢谢，没有托尾现象。我没有表达清楚，我所说的一次一个结果是这样的，A样品今天有目的条带，明天再做A就没有了，B样品C样品可能又出现目的条带了，难道是我的引物特异性不好么？
...

是不是你加PCR体系时，漏加了东西
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4楼2014-04-28 10:53:03
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summit061800

新虫 (初入文坛)
这个应该没有，我也怀疑过，所以我加的时候特别留意了。哎，这几天我都不敢做了

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5楼2014-04-29 03:29:23
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是出现这种情况，做的菌落PCR。上周做的PCR是出现有目的条带，然后再重复就什么也P不出来了，各种条件都是一样的，菌落和条件也是一样的，真心搞不懂原因啊！
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6楼2014-04-29 10:09:48
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