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qinbanruo

新虫 (正式写手)

[求助] pcr, 电泳,DNA条带 已有3人参与

pcr后,电泳跑出来的DNA条带很弱,是怎么问题?

pcr, 电泳,DNA条带


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:39:58
我也出过这样的情况,DNA浓度没问题,PCR后有一半的条带不亮。可能是引物和DNA匹配有些差异,比如说我的引物完全按A种青霉DNA设计的,但是PCR的这个DNA是B种青霉的。
你的这个很正常吧,产物分子量很小。溶胶和跑胶严格按照标准来做会好些。
我是同时把循环数+5,引物量加倍,最后做出的图形很漂亮。
坚持!
2楼2017-04-07 16:23:38
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:40:14
引物二聚体很亮,建议减少引物、提高退火温度
条带太弱,建议适当增加循环、增加模板量或者降低退火温度
3楼2017-04-07 22:23:28
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流水青苔

木虫 (著名写手)

楼主有空的话,可以做下这样的实验吗?假设现在退火温度为55度,①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿喷,纯属个人想知道结果,如有问题望指正。

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4楼2017-04-07 23:25:47
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普通回帖

luil121

银虫 (小有名气)

如果是跑胶后染色的话可以考虑下配置新的染液

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-04-08 00:22:43
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

marker亮不啊 换实验室后发现电泳仪器,染色试剂也很关键
6楼2017-04-10 13:30:28
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qinbanruo

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stabilized at 2017-04-07 16:23:38
我也出过这样的情况,DNA浓度没问题,PCR后有一半的条带不亮。可能是引物和DNA匹配有些差异,比如说我的引物完全按A种青霉DNA设计的,但是PCR的这个DNA是B种青霉的。
你的这个很正常吧,产物分子量很小。溶胶和跑胶 ...

嗯嗯,好的,谢谢~有的时候还会出现不出条带的问题

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7楼2017-04-13 10:10:05
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qinbanruo

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2017-04-07 22:23:28
引物二聚体很亮,建议减少引物、提高退火温度
条带太弱,建议适当增加循环、增加模板量或者降低退火温度

好的,谢谢~~

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8楼2017-04-13 10:10:21
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qinbanruo

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 流水青苔 at 2017-04-07 23:25:47
楼主有空的话,可以做下这样的实验吗?假设现在退火温度为55度,①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿喷,纯属个人想知 ...

五个循环会不会太少了???

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9楼2017-04-13 10:11:30
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qinbanruo

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yingxiaoying at 2017-04-10 13:30:28
marker亮不啊 换实验室后发现电泳仪器,染色试剂也很关键

marker 很亮,这些应该都没很大问题,师兄他们也在用,跑出来的带蛮好的

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10楼2017-04-13 10:12:48
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