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ssitxtgm

新虫 (小有名气)


[交流] pet28a重组问题

新手做的时候突然想到个问题。我使用28a作为载体,双酶切ncoI和bamhI,插入完整171bp的orf,这样就连接不上histag标签了。那么我这里表达的蛋白是多大呢。直接粗略换算171bp吗?求大神教下,这个在pet中表达蛋白kD是如何换算的。

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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)



ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
直接换算就行了,从ATG算到终止密码子
2楼2017-03-14 23:32:06
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borrysa

金虫 (正式写手)



ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
ATG 在NcoI 那开始
3楼2017-03-14 23:47:44
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渭城朝风

新虫 (初入文坛)



ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
可以这么算,多几个氨基酸对分子量的影响不大
4楼2017-03-15 11:13:15
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ssitxtgm

新虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 渭城朝风 at 2017-03-15 11:13:15
可以这么算,多几个氨基酸对分子量的影响不大

那如何我将下游引物的终止密码字给去掉,使其连接pet28a的c端histag,这样可以嘛?

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5楼2017-03-15 13:01:58
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wqq4706

新虫 (初入文坛)



ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
28a里面有2个histag标签呢~一个C端,一个N端,插入171bp完全没有问题啊,蛋白大小不是这样预估的,你可以把氨基酸序列换成蛋白质序列,然后用软件预测~
6楼2017-03-15 19:33:49
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ssitxtgm

新虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by wqq4706 at 2017-03-15 19:33:49
28a里面有2个histag标签呢~一个C端,一个N端,插入171bp完全没有问题啊,蛋白大小不是这样预估的,你可以把氨基酸序列换成蛋白质序列,然后用软件预测~

没错哈,N端和C端都有6his。但是我NcoI和BhamI把N端的切掉了,而且是完整的orf整段插入,这样C端不是也连不上嘛…我现在考虑如何连接c端histag或者N端重选酶切位点?

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7楼2017-03-15 23:01:24
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