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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pet28a重组问题
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ssitxtgm

新虫 (小有名气)

[交流] pet28a重组问题

新手做的时候突然想到个问题。我使用28a作为载体，双酶切ncoI和bamhI，插入完整171bp的orf，这样就连接不上histag标签了。那么我这里表达的蛋白是多大呢。直接粗略换算171bp吗？求大神教下，这个在pet中表达蛋白kD是如何换算的。

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1楼 2017-03-14 17:29:34
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
★
ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
直接换算就行了，从ATG算到终止密码子
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2楼2017-03-14 23:32:06
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borrysa

金虫 (正式写手)
★
ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
ATG 在NcoI 那开始
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3楼2017-03-14 23:47:44
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渭城朝风

新虫 (初入文坛)
★
ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
可以这么算，多几个氨基酸对分子量的影响不大
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4楼2017-03-15 11:13:15
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ssitxtgm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 渭城朝风 at 2017-03-15 11:13:15
可以这么算，多几个氨基酸对分子量的影响不大

那如何我将下游引物的终止密码字给去掉，使其连接pet28a的c端histag，这样可以嘛？

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5楼2017-03-15 13:01:58
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wqq4706

新虫 (初入文坛)
★
ssitxtgm(金币+1): 谢谢参与
28a里面有2个histag标签呢~一个C端，一个N端，插入171bp完全没有问题啊，蛋白大小不是这样预估的，你可以把氨基酸序列换成蛋白质序列，然后用软件预测~
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6楼2017-03-15 19:33:49
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ssitxtgm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wqq4706 at 2017-03-15 19:33:49
28a里面有2个histag标签呢~一个C端，一个N端，插入171bp完全没有问题啊，蛋白大小不是这样预估的，你可以把氨基酸序列换成蛋白质序列，然后用软件预测~

没错哈，N端和C端都有6his。但是我NcoI和BhamI把N端的切掉了，而且是完整的orf整段插入，这样C端不是也连不上嘛…我现在考虑如何连接c端histag或者N端重选酶切位点？

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7楼2017-03-15 23:01:24
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