应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 诱导不表达
121/2返回列表12下一页
查看: 1989  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1296785943

铁虫 (初入文坛)

[求助] 诱导不表达 已有4人参与

我的目的因为2.8kb,用pet28a-sumo的载体进行重组表达。重组后用质粒进行PCR可以扩出目的条带；酶切鉴定也是对的，测序存在三个点突变，但用NCBI中的ORF finder进行分析结果如图：
       从图来看，我的重组质粒应该没问题。但我将重组质粒转化到BL21（DE3）中，在18、37 摄氏度均不表达。请问这是什么原因？！之前我用pet17b做载体可成功在BL21（DE3）中表达，可这次换个载体为什么在BL21（DE3）中就不表达了？！！
       急需帮助，谢谢！！！

诱导不表达
图片1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-03-24 19:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
测序存在三个点突变，会不会是因为这个？而且，突变了你也敢用啊。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-24 19:24:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-24 19:24:10
测序存在三个点突变，会不会是因为这个？而且，突变了你也敢用啊。

但是做阅读框的分析可以翻译出1093个AA呀，将翻译 的氨基酸做同源比对，

比对结果中含目的序列中的保守结构域，载体上的标签也在！
我需要重新做重组吗？
诱导不表达-1
图片3.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-25 08:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1296785943 at 2014-03-25 08:56:17
但是做阅读框的分析可以翻译出1093个AA呀，将翻译 的氨基酸做同源比对，

比对结果中含目的序列中的保守结构域，载体上的标签也在！
我需要重新做重组吗？

图片3.jpg
...

这个高难度的问题还是问下你实验室的师兄师姐吧，。我也坐等大神。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-25 15:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-25 15:35:02
这个高难度的问题还是问下你实验室的师兄师姐吧，。我也坐等大神。...

目前实验室就我一个人做分子，请教其他实验室的人也不知道怎么回事。真是愁煞人呀！不过还是谢谢啦！
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-25 20:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biology-boy

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2014-03-26 10:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biology-boy at 2014-03-26 10:24:54
你用18 和37度 表达？ 这个温度不合适吧，一般我们都是二十几度，生长温度和诱导表达温度不宜相差太大的。

这个不能这么说的，我们实验室用37℃诱导的照样表达，要看情况而定
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-03-26 11:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m情深守护

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是需要诱导表达啊，或者还是你的目的基因太大了，表达的蛋白形成了包涵体呢？希望懂得人能够给予应助。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-26 16:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议楼主诱导一下，我做的pet28a+的重组载体导入BL21（DE3）中，就是用IPTG诱导表达6h的，并且表达的蛋白是以包涵体形式存在的。
仅做参考
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-26 17:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1296785943

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by rv1nm2y at 2014-03-26 17:17:19
建议楼主诱导一下，我做的pet28a+的重组载体导入BL21（DE3）中，就是用IPTG诱导表达6h的，并且表达的蛋白是以包涵体形式存在的。
仅做参考

我换了Rosetta的感受态，18度诱导表达了。还没来得 及分析是不是在包涵体表达。请问如果在包涵体表达，你们是怎么做纯化的呢？纯化效果怎么样？谢谢！！！
赞一下 回复此楼
10楼2014-03-28 10:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1296785943 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭