| 查看: 1018 | 回复: 6 | ||
转基因猴子木虫 (正式写手)
|
[求助]
如何将培养基中的酶所处环境换成Buffer
|
|
虫子们，最近遇到一个问题 我做的重组大肠，使用的是pET28a质粒，BL21(DE3)为宿主，在TB培养基中用IPTG诱导离心之后，上清液中目的蛋白电泳纯，只有一条带。然后我想对目的蛋白做个圆二色谱分析二级结构。然后问题出现了，做CD 的时候，机器显示电压太高，出来的数据也不是很理想。 然后我用透析袋对样品用PBS buffer进行透析，透析到样品颜色比较淡，仍然显示电压太高。将样品冷冻干燥后发现蛋白也不是很好抠出来，也容易带入杂质。 请问各位虫友，有没有什么办法，在我发酵完之后，能把上清中的酶所处环境换为我所需的PBS buffer？ PS： pet28a 是个不分泌的质粒，具体为什么我的酶能分泌到胞外我不太清楚，但这不是重点。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有146人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 多种细胞的培养方法
已经有53人回复
- 流式细胞分析分选术
已经有5人回复
- 手提基因组方法遇到的问题
已经有12人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 产酶发酵培养基封口问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】将PCR反应体系中的buffer,mg2+,dNTP,Taq酶以及引物和水混合后-20℃长期�
已经有10人回复
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-05-08 16:46:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
转基因猴子: 金币+44, ★★★很有帮助 2013-05-09 09:42:32
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-09 10:26:33
转基因猴子: 金币+44, ★★★★★最佳答案 2013-09-02 18:30:47
感谢参与，应助指数 +1
转基因猴子: 金币+44, ★★★很有帮助 2013-05-09 09:42:32
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-09 10:26:33
转基因猴子: 金币+44, ★★★★★最佳答案 2013-09-02 18:30:47
| 这个先看你的蛋白的体积有多大？如果体系很小的话，直接抽滤，去掉TB中许多不溶杂质，然后再用透析的方法还你的PBS buffer，中间建议换一次PBSbuffer，透析的比例最好大一些，可以把培养基尽量透掉；如果体系较大，建议先还是抽滤，再用切向流浓缩仪浓缩至较小体积，(避免蛋白发生沉淀) 然后再透析换buffer！ |
3楼2013-05-08 19:43:34
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-05-09 09:44:10
5楼2013-05-09 09:56:23
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2013-05-09 09:58:41
7楼2013-05-09 10:18:42
