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转基因猴子木虫 (正式写手)
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如何将培养基中的酶所处环境换成Buffer
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虫子们，最近遇到一个问题 我做的重组大肠，使用的是pET28a质粒，BL21(DE3)为宿主，在TB培养基中用IPTG诱导离心之后，上清液中目的蛋白电泳纯，只有一条带。然后我想对目的蛋白做个圆二色谱分析二级结构。然后问题出现了，做CD 的时候，机器显示电压太高，出来的数据也不是很理想。 然后我用透析袋对样品用PBS buffer进行透析，透析到样品颜色比较淡，仍然显示电压太高。将样品冷冻干燥后发现蛋白也不是很好抠出来，也容易带入杂质。 请问各位虫友，有没有什么办法，在我发酵完之后，能把上清中的酶所处环境换为我所需的PBS buffer？ PS： pet28a 是个不分泌的质粒，具体为什么我的酶能分泌到胞外我不太清楚，但这不是重点。 |
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4楼2013-05-09 09:44:10
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2楼2013-05-08 16:46:06
【答案】应助回帖
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| 这个先看你的蛋白的体积有多大？如果体系很小的话，直接抽滤，去掉TB中许多不溶杂质，然后再用透析的方法还你的PBS buffer，中间建议换一次PBSbuffer，透析的比例最好大一些，可以把培养基尽量透掉；如果体系较大，建议先还是抽滤，再用切向流浓缩仪浓缩至较小体积，(避免蛋白发生沉淀) 然后再透析换buffer！ |
3楼2013-05-08 19:43:34
5楼2013-05-09 09:56:23