| 查看: 2032 | 回复: 1 | ||
[求助]
两种重组质粒的重新构建问题
|
|
有两个质粒：pEGFP-N3质粒和PET-28a质粒，想从pEGFP-N3质粒中获得EGFP基因并 将其导入到PET-28a质粒中重新构建表达载体——PET-28a-EGFP并表达绿色荧光蛋白，有文献以EGFP基因为模板设计引物经PCR扩增获得目的基因，并将经纯化的目的基因为模板，再设计引物引入酶切位点进行扩增得到引入酶切位点的目的基因；另外将PET-28a质粒载体转化大肠埃希菌DH5α，培养过夜后提取质粒，并进行双酶切．经1.0％琼脂糖凝胶电泳检验后，切下线性质粒条带进行纯化回收。 我想问的是：为什么要将PET-28a质粒载体转化DH5α后再重新提取质粒，而不是直接将PET-28a质粒进行双酶切？是怕质粒的量不够吗？还是有其他原因？另外，假如我想直接通过双酶切从pEGFP-N3质粒中获得整段的EGFP基因，再用相同的双酶切体系对PET-28a质粒进行酶切，最后再将其重新连接起来获得新的重组质粒，在网上看到卖的质粒规格一般是2ug，是否够用呢？是否需要分别将pEGFP-N3质粒和PET-28a质粒分别转化DH5α后再分别重新提取质粒？还是可以直接将这两种质粒进行酶切？ 由于没有做过分子生物方面的实验，有很多不懂的地方，麻烦高手帮帮忙，谢谢大家了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有51人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
-
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展
已经有0人回复
-
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍
已经有0人回复
-
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？
已经有6人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-20 05:34:03