| 查看: 1943 | 回复: 1 | ||
[求助]
两种重组质粒的重新构建问题
|
|
有两个质粒：pEGFP-N3质粒和PET-28a质粒，想从pEGFP-N3质粒中获得EGFP基因并 将其导入到PET-28a质粒中重新构建表达载体——PET-28a-EGFP并表达绿色荧光蛋白，有文献以EGFP基因为模板设计引物经PCR扩增获得目的基因，并将经纯化的目的基因为模板，再设计引物引入酶切位点进行扩增得到引入酶切位点的目的基因；另外将PET-28a质粒载体转化大肠埃希菌DH5α，培养过夜后提取质粒，并进行双酶切．经1.0％琼脂糖凝胶电泳检验后，切下线性质粒条带进行纯化回收。 我想问的是：为什么要将PET-28a质粒载体转化DH5α后再重新提取质粒，而不是直接将PET-28a质粒进行双酶切？是怕质粒的量不够吗？还是有其他原因？另外，假如我想直接通过双酶切从pEGFP-N3质粒中获得整段的EGFP基因，再用相同的双酶切体系对PET-28a质粒进行酶切，最后再将其重新连接起来获得新的重组质粒，在网上看到卖的质粒规格一般是2ug，是否够用呢？是否需要分别将pEGFP-N3质粒和PET-28a质粒分别转化DH5α后再分别重新提取质粒？还是可以直接将这两种质粒进行酶切？ 由于没有做过分子生物方面的实验，有很多不懂的地方，麻烦高手帮帮忙，谢谢大家了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有127人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？
已经有6人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-20 05:34:03
