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[交流]
pET28a基因重组问题
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| 克隆基因起始密码子前面还有30多个碱基,用EcoI和HindIII酶解，插入pET28a,转入BL21(DE3)，那30多个碱基翻译成氨基酸吗？pET28a的N-端和C-端都有6个His标签，并且N-端还有T7标签，翻译后的蛋白两端都有His标签及T7标签吗？并且在标签序列之间还有一些其他的限制酶切位点的碱基，也会翻译成相应的氨基酸吗？如果有的话我的重组蛋白两端就会有了一些多余的氨基酸序列，和原始菌株的蛋白比又会有哪些方面的差异（如等电点，疏水性，亚细胞定位等）？（该蛋白通过实验证实能被Ni柱较好的吸附，并具较好活性）请各位同仁指点。 |
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