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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » pET28a基因重组问题
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guozejing

银虫 (小有名气)

[交流] pET28a基因重组问题

克隆基因起始密码子前面还有30多个碱基,用EcoI和HindIII酶解，插入pET28a,转入BL21(DE3)，那30多个碱基翻译成氨基酸吗？pET28a的N-端和C-端都有6个His标签，并且N-端还有T7标签，翻译后的蛋白两端都有His标签及T7标签吗？并且在标签序列之间还有一些其他的限制酶切位点的碱基，也会翻译成相应的氨基酸吗？如果有的话我的重组蛋白两端就会有了一些多余的氨基酸序列，和原始菌株的蛋白比又会有哪些方面的差异（如等电点，疏水性，亚细胞定位等）？（该蛋白通过实验证实能被Ni柱较好的吸附，并具较好活性）请各位同仁指点。
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1楼 2012-04-29 10:56:21
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-07-12 23:29:59
载体上不是有T7启动子吗，加入IPTG诱导，它就会表达了。
多出的一段标签，我觉得对整个蛋白质的构象、功能应该影响不大。并不会影响到活性中心。
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3楼2012-07-12 22:23:50
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longdlut2楼
2012-05-03 12:03   回复  
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