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guozejing

银虫 (小有名气)


[交流] pET28a基因重组问题

克隆基因起始密码子前面还有30多个碱基,用EcoI和HindIII酶解,插入pET28a,转入BL21(DE3),那30多个碱基翻译成氨基酸吗?pET28a的N-端和C-端都有6个His标签,并且N-端还有T7标签,翻译后的蛋白两端都有His标签及T7标签吗?并且在标签序列之间还有一些其他的限制酶切位点的碱基,也会翻译成相应的氨基酸吗?如果有的话我的重组蛋白两端就会有了一些多余的氨基酸序列,和原始菌株的蛋白比又会有哪些方面的差异(如等电点,疏水性,亚细胞定位等)?(该蛋白通过实验证实能被Ni柱较好的吸附,并具较好活性)请各位同仁指点。
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢! 2012-07-12 23:29:59
载体上不是有T7启动子吗,加入IPTG诱导,它就会表达了。
多出的一段标签,我觉得对整个蛋白质的构象、功能应该影响不大。并不会影响到活性中心。
3楼2012-07-12 22:23:50
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longdlut2楼
2012-05-03 12:03   回复  
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