| 查看: 13261 | 回复: 97 | |||
[求助]
菌落pcr该怎么做 已有25人参与
|
|||
|
最近做菌落pcr总是做不出来，而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的，求做菌落pcr注意事项，细节，个人经验等 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于red重组的问题
已经有3人回复
- 菌落PCR总有几株菌P不出来该怎么办
已经有4人回复
- Red重组时候为什么会出现两条条带？
已经有3人回复
- 微生物分子和发酵方面文章大修求助
已经有1人回复
- 微生物分子和发酵方面文章大修求助
已经有0人回复
- TA克隆老是失败，求高人解惑
已经有17人回复
- 菌液PCR，酶切鉴定都正确，测序结果却不是想要的目的基因，WHY？
已经有1人回复
- 真菌分子生物学鉴定方面的问题！微生物新手求助！
已经有2人回复
- 革兰氏阳性菌怎么做菌落PCR
已经有0人回复
- 其实，好久我都走偏了
已经有10人回复
- 同尾酶酶切及连接
已经有6人回复
- 关于毕赤酵母表达
已经有22人回复
- 关于酵母表达
已经有4人回复
- 关于重组质粒遗传转化中载体的问题
已经有2人回复
- 菌种生理生化特性
已经有3人回复
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:45
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:45
|
挑菌落时选平皿上的单菌落，非常小的刚长出的那种，用无菌枪头刮下，放到10微升的无菌水搅拌，外观看起来稍微有点混浊。然后pcr时20微体系模板加1～5微就够了 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-11-16 13:04:00
xiaominzheng
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1219
- 红花: 1
- 帖子: 8
- 在线: 3小时
- 虫号: 5237166
- 注册: 2016-11-14
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤干细胞
【答案】应助回帖
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:03:39
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:03:39
|
看大家好多都是用的枪头挑菌，小建议：用牙签的尖尖沾一下确定碰着菌就好，然后抖两下就可以了。 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
y38351413138楼2016-11-22 22:31:09
hubeigxkkk
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 27.5
- 红花: 2
- 帖子: 11
- 在线: 15.2小时
- 虫号: 3906545
- 注册: 2015-06-03
- 专业: 植物生理与生化
23楼2016-11-17 17:33:59
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 23:00:20
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 23:00:20
|
我都是挑菌到400ul的LB里，取1ul当做模板进行PCR，剩下的在37度培养。菌液PCR能做出来的再在试管培养，保种测序。菌液PCR能做出来的都有，做不出来的都没有。 发自小木虫IOS客户端 |
36楼2016-11-20 22:07:42
wangxiao318
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4130.3
- 散金: 50
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 253
- 在线: 76.2小时
- 虫号: 2967683
- 注册: 2014-02-14
- 性别: GG
- 专业: 病原真菌学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:58:19
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:58:19
|
如果是平板，挑菌时沾一点就行，不要以肉眼看到作标准，预变性时间稍长些，以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液，最好是取新鲜的，生长状态最好时的，1微升足矣。另外，实验时加上对照，阴性的，阳性的，便于排查。 发自小木虫IOS客户端 |
26楼2016-11-18 08:15:56
小冀-
版主 (著名写手)
- 应助: 713 (博后)
- 贵宾: 3.033
- 金币: 11446.9
- 散金: 1055
- 红花: 82
- 帖子: 2509
- 在线: 445.9小时
- 虫号: 1521695
- 注册: 2011-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:22:42
xn8008: 应助指数+1 2017-01-12 08:22:55
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:22:42
xn8008: 应助指数+1 2017-01-12 08:22:55
| 挑菌的时候挑少点，不要太多，否则p出来 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2016-11-16 08:47:55
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:24
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:24
|
挑菌使用镊子夹取10ul枪头挑菌 在配好体系的pcr管中沾1-2下即可 会不会是挑菌抠到太多培养基 实际上菌落并没有接触到管中的液体，你的pcr没有模板所以扩不出来 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2016-11-16 09:02:17
16楼2016-11-17 08:19:33
上官凤舞
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1153.7
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 385
- 在线: 20.5小时
- 虫号: 5094476
- 注册: 2016-10-08
- 性别: MM
- 专业: 微生物学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:04:08
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:04:08
|
阳性菌的话，需要破壁，加溶菌酶作用，或者反复沸水煮冰上冻，最后离心即可 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
18楼2016-11-17 08:49:37
hattie919822
银虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 313.1
- 帖子: 24
- 在线: 14.4小时
- 虫号: 4062766
- 注册: 2015-09-10
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
32楼2016-11-18 16:52:52
鱼》
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1771.2
- 散金: 315
- 红花: 2
- 帖子: 363
- 在线: 47.2小时
- 虫号: 5211401
- 注册: 2016-11-07
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
33楼2016-11-18 17:10:24
remain2018
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 443.7
- 散金: 220
- 帖子: 340
- 在线: 59.8小时
- 虫号: 4884912
- 注册: 2016-07-31
- 性别: MM
- 专业: 免疫学
【答案】应助回帖
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:23:48
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:23:48
|
挑单菌落，一点就够。然后pcr时20微体系模板加1微升，实在P不出来，用特异性引物试试 发自小木虫Android客户端 |
64楼2016-11-30 19:48:48
wenwanhong
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 38.9
- 帖子: 16
- 在线: 4.9小时
- 虫号: 2543967
- 注册: 2013-07-13
- 性别: MM
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:22
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:22
菌落pcr，我一般都是用小枪头粘一小坨用枪吹打入预混液当中，在pcr仪上99℃10min破菌，然后再加taq酶进行pcr，屡试不爽  试一下吧，预祝成功发自小木虫Android客户端 |
81楼2016-12-21 16:37:41
缘来是伊
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1640.4
- 散金: 24
- 帖子: 51
- 在线: 75.8小时
- 虫号: 2151125
- 注册: 2012-11-27
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:29
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:29
|
这个得看你的菌种，如果是大肠的话很容易的，如果是其他尤其是阳性菌的话需要裂解液裂解一下再做 发自小木虫Android客户端 |
88楼2016-12-30 18:49:49
a13515517892
木虫 (小有名气)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 4597.6
- 散金: 700
- 红花: 14
- 帖子: 292
- 在线: 65.3小时
- 虫号: 1076526
- 注册: 2010-08-18
- 专业: 抗体工程学
5楼2016-11-16 10:56:06
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 905 (博后)
- 金币: 16510.5
- 散金: 1654
- 红花: 120
- 沙发: 40
- 帖子: 14451
- 在线: 2170.6小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
65楼2016-12-01 16:34:24
4楼2016-11-16 09:15:27
6楼2016-11-16 12:39:17
7楼2016-11-16 12:40:06
8楼2016-11-16 12:40:50
9楼2016-11-16 12:42:36