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菌落pcr该怎么做 已有25人参与
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最近做菌落pcr总是做不出来，而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的，求做菌落pcr注意事项，细节，个人经验等 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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zgs_2013
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挑菌落时选平皿上的单菌落，非常小的刚长出的那种，用无菌枪头刮下，放到10微升的无菌水搅拌，外观看起来稍微有点混浊。然后pcr时20微体系模板加1～5微就够了 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-11-16 13:04:00
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看大家好多都是用的枪头挑菌，小建议：用牙签的尖尖沾一下确定碰着菌就好，然后抖两下就可以了。 发自小木虫IOS客户端 |
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y38351413138楼2016-11-22 22:31:09
23楼2016-11-17 17:33:59
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我都是挑菌到400ul的LB里，取1ul当做模板进行PCR，剩下的在37度培养。菌液PCR能做出来的再在试管培养，保种测序。菌液PCR能做出来的都有，做不出来的都没有。 发自小木虫IOS客户端 |
36楼2016-11-20 22:07:42
wangxiao318
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如果是平板，挑菌时沾一点就行，不要以肉眼看到作标准，预变性时间稍长些，以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液，最好是取新鲜的，生长状态最好时的，1微升足矣。另外，实验时加上对照，阴性的，阳性的，便于排查。 发自小木虫IOS客户端 |
26楼2016-11-18 08:15:56
小冀-
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| 挑菌的时候挑少点，不要太多，否则p出来 |
2楼2016-11-16 08:47:55
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挑菌使用镊子夹取10ul枪头挑菌 在配好体系的pcr管中沾1-2下即可 会不会是挑菌抠到太多培养基 实际上菌落并没有接触到管中的液体，你的pcr没有模板所以扩不出来 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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3楼2016-11-16 09:02:17
16楼2016-11-17 08:19:33
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阳性菌的话，需要破壁，加溶菌酶作用，或者反复沸水煮冰上冻，最后离心即可 发自小木虫Android客户端 |
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18楼2016-11-17 08:49:37
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33楼2016-11-18 17:10:24
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挑单菌落，一点就够。然后pcr时20微体系模板加1微升，实在P不出来，用特异性引物试试 发自小木虫Android客户端 |
64楼2016-11-30 19:48:48
wenwanhong
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菌落pcr，我一般都是用小枪头粘一小坨用枪吹打入预混液当中，在pcr仪上99℃10min破菌，然后再加taq酶进行pcr，屡试不爽  试一下吧，预祝成功发自小木虫Android客户端 |
81楼2016-12-21 16:37:41
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这个得看你的菌种，如果是大肠的话很容易的，如果是其他尤其是阳性菌的话需要裂解液裂解一下再做 发自小木虫Android客户端 |
88楼2016-12-30 18:49:49
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