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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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sibei1

新虫 (小有名气)
菌p很easy的，就把菌落当成平时上样加的dna，蘸一下就行，菌里面质粒是很多的，足够p出来

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时代遗孤
51楼2016-11-24 21:41:49
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casjq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做菌落PCR的时候一定要注意加上阳性和阴性对照，如果出问题可以找出问题出在哪里，挑菌落的时候用灭菌牙签或者小枪头挑取少许单菌落然后在PCR体系里面混匀一下就可以了
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52楼2016-11-25 11:02:37
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zhao_shujing

金虫 (小有名气)
配置10微升的体系，挑菌用枪头或者牙签都可以，牙签最好用竹制品，挑取单个菌落，挑的时候可以把枪头或牙签稍放平一些，不要扎下去，不然会挑到培养基，轻轻刮一下就行。然后放到10微升体系，让菌和体系充分混匀。我做菌P的时候，有的也是很浑浊，好在都有结果

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53楼2016-11-26 10:00:35
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songli3530

银虫 (小有名气)
实在不行，可以尝试下90度以上水浴加热几分钟试试

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54楼2016-11-26 10:17:39
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-16 08:47:55
挑菌的时候挑少点，不要太多，否则p出来

否则P不出来

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A right way maybe not a good way！
55楼2016-11-26 10:39:15
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
55楼: Originally posted by 我爱chi辣椒 at 2016-11-26 10:39:15
否则P不出来
...

少了个"不"

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···
56楼2016-11-26 10:58:34
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
引用回帖:
56楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-26 10:58:34
少了个"不"
...

只是开玩笑提出来，别人会理解的。

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A right way maybe not a good way！
57楼2016-11-26 10:59:27
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
57楼: Originally posted by 我爱chi辣椒 at 2016-11-26 10:59:27
只是开玩笑提出来，别人会理解的。
...

嗯呢

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···
58楼2016-11-26 11:04:04
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小小c的123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我一般都是在超净工作台用无菌牙签蘸取一点点，点在pcr反应体系里面。注意交叉污染，要做灭菌牙签的不沾菌的对照。pcr反应程序第一步94℃预热15min-20min，保证细胞破裂完全。
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59楼2016-11-26 17:31:53
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yakun123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by C小杨 at 2016-11-17 17:20:43
菌落PCR比菌液PCR更容易出现假阳性，建议使用菌液PCR，摇菌2ml，2-3小时加一微升作模板即可。

为什么菌液pcr比菌落pcr假阳性少？有什么道理吗

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60楼2016-11-27 08:20:28
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