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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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joblee

木虫 (正式写手)
挑取阳性菌落没问题的话，后面预变性时间设为10分钟

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71楼2016-12-08 20:39:53
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
41楼: Originally posted by y383514131 at 2016-11-23 16:46:38
我就是取1ul结果p不出来，是不是要设温度梯度
...

新鲜菌液或菌落，94度5min以上预变性是关键！！

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72楼2016-12-09 19:28:17
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上官凤舞

新虫 (正式写手)
阳性菌还是阴性菌呢？

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73楼2016-12-09 19:35:27
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panda传奇

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

正常程序。把预变性时间提高到94度 10min。蘸的菌尽量少一些
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74楼2016-12-14 13:45:25
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笑傲江鱼

新虫 (小有名气)
牙签挑一个就好了阿

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75楼2016-12-14 14:53:58
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xl8284

新虫 (初入文坛)
用枪头稍稍挑一点就可以。别挑的太多，不然和普通PCR一样，模板太多会抑制PCR
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76楼2016-12-17 13:59:11
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王木木2016

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

菌落加的不要太多，预变性时间略长一点

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77楼2016-12-17 14:10:41
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaominzheng at 2016-11-22 22:31:09
看大家好多都是用的枪头挑菌，小建议：用牙签的尖尖沾一下确定碰着菌就好，然后抖两下就可以了。

本科期间一直这么挑克隆过来的老板还让回收牙签

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78楼2016-12-17 19:31:02
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山中雨鱼

新虫 (小有名气)
我以前是挑菌，在1毫升培养液培养4小时，取1ul做10ul的体系。预变性用95℃4min（本人大三，知识有限，仅供参考），

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79楼2016-12-18 20:08:09
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ying0529

银虫 (初入文坛)
以前遇到过，我的是挑菌挑的多了，只要一点点就好，如果你是做20ul体系，用牙签尖蘸一点点就OK了

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80楼2016-12-19 23:47:47
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