24小时热门版块排行榜    

查看: 13262  |  回复: 97

wenwanhong

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:22
菌落pcr,我一般都是用小枪头粘一小坨用枪吹打入预混液当中,在pcr仪上99℃10min破菌,然后再加taq酶进行pcr,屡试不爽试一下吧,预祝成功

发自小木虫Android客户端
81楼2016-12-21 16:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

y383514131

银虫 (小有名气)

引用回帖:
81楼: Originally posted by wenwanhong at 2016-12-21 16:37:41
菌落pcr,我一般都是用小枪头粘一小坨用枪吹打入预混液当中,在pcr仪上99℃10min破菌,然后再加taq酶进行pcr,屡试不爽试一下吧,预祝成功

我一般都用primer star ,你说的taq不会用

发自小木虫IOS客户端
此事说来终觉浅,莫问出处便是真
82楼2016-12-21 16:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenwanhong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
82楼: Originally posted by y383514131 at 2016-12-21 16:57:06
我一般都用primer star ,你说的taq不会用
...

全式金的taq酶,按照说明书上配溶液。比primer star便宜,primer star不适合菌落pcr用

发自小木虫Android客户端
83楼2016-12-21 17:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenwanhong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by y383514131 at 2016-11-16 08:38:01
最近做菌落pcr总是做不出来,而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的,求做菌落pcr注意事项,细节,个人经验等
youlinglyw

primer star是高保真酶对模板要求严格,适合片段扩增,而taq酶对体系要求低,适合菌落pcr,而且很便宜。注意菌落pcr前一定要99度10min破菌否则p不出来

发自小木虫Android客户端
84楼2016-12-21 17:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻糖先生

新虫 (初入文坛)

85楼2016-12-21 22:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用灭菌牙签挑单菌落放入350ul培养基中搅几下,然后37度200rpm培养3h,取2ul作为模板PCR,菌液PCR条带非常亮的一般都是阳性克隆
86楼2016-12-28 20:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)

87楼2016-12-28 23:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

缘来是伊

木虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:24:29
这个得看你的菌种,如果是大肠的话很容易的,如果是其他尤其是阳性菌的话需要裂解液裂解一下再做

发自小木虫Android客户端
88楼2016-12-30 18:49:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迎风辉翔

铁虫 (初入文坛)

可能没裂解好,可延长预变性时间至8-10分钟,或挑菌于20uL无菌水中煮10分钟,放冰上冷却,离心,取上清做模板

发自小木虫Android客户端
89楼2017-01-12 00:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

D的小酒窝

金虫 (小有名气)

90楼2017-01-12 21:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 y383514131 的主题更新
信息提示
请填处理意见