24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 13618  |  回复: 97

jianglin0116

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

细菌涂板,长成单菌落之后,用灭菌的小枪头挑取单菌落,蘸在液体培养基里面吸打混匀,37℃,270r培养3小时,然后吸取一微升作为模板,pcr体系可以25微升,也可以50微升,体系里包括模板,引物,dntp,mg离子,k离子,酶,buffer等,看你是用单酶还是用MIX,如果用MIX的话很方便,推荐擎科生物公司的低盐金牌,菌p很给力,体系构成是,模板一微升,上下游引物各一微升,剩余用金牌MIX补齐就可以了,程序要看你引物的Tm值确定退火温度,延伸时间要看你片段大小,擎科的金牌mix延伸速度很快,5-10s/kb,短片段半个多小时就可以扩出来

发自小木虫IOS客户端
91楼2017-01-13 13:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

451533993

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

引用回帖:
88楼: Originally posted by 缘来是伊 at 2016-12-30 18:49:49
这个得看你的菌种,如果是大肠的话很容易的,如果是其他尤其是阳性菌的话需要裂解液裂解一下再做

请教一下 细菌的新种快速鉴定法

发自小木虫Android客户端
每天进步一点点!~
92楼2017-01-13 15:02:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iayala

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

其实分子实验的原则确实是具体问题具体分析,没有什么通用的方法。
就说个人的经验吧,别挑太多,一点点就够了;前边大变性的时间可以稍长,5~7min
93楼2017-01-13 16:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wkj5257

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

菌多少没有多大关系的,可能就是转化呈现阴性

发自小木虫Android客户端
分子生物学,未来科技的领导者
94楼2017-01-13 18:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

预估预估

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

用小抢头挑单个菌落。应该可以的。

发自小木虫Android客户端
我就是我,我就是人间不一样的烟火。
95楼2017-01-16 18:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迎风辉翔

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我认为主要是模板的问题,可煮沸10min,冷却离心取上清

发自小木虫Android客户端
96楼2017-01-29 21:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王方平

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

我在此可以跟你讲一下我菌检的习惯:
1、在每个平板上挑多个(一般16个)单克隆分别分开接种至加有载体对应抗生素的500μL的LB培养液中,37℃220rpm振荡培养8—10h;
2、去培养物作为模板(这是一个筛选过程,培养后你会发现有的培养物浑浊,有的澄清,我们做pcr扩增是只选择浑浊的培养物),利用载体上的通用引物或者目的序列的特异引物进行PCR扩增。在进行PCR扩增时一般会做个对照,在对照实验中不加任何模版,扩增体系其他成分正常,以验证体系的影响。另预变性的时间要比普通PCR的预设时间长,便于细菌胞壁的破裂。
希望能够帮到你
97楼2017-02-01 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenmx1257

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

这些都是好经验。但是我们死活扩不出。换了一家公司的premix体系就怎么做都怎么成功了。

发自小木虫Android客户端
98楼2017-05-24 09:29:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 y383514131 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 265求调剂 +6 yelck 2026-04-01 7/350 2026-04-01 09:53 by yelck
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
[考研] 材料专硕调剂 +13 椰椰。 2026-03-29 13/650 2026-03-31 16:37 by hypershenger
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +6 星沉uu 2026-03-26 7/350 2026-03-31 10:19 by GdShizy
[考研] 276求调剂 +3 赵久华 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 英一数一408,总分284,二战真诚求调剂 +3 12.27 2026-03-30 5/250 2026-03-31 00:47 by 不吃芒果17
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 292求调剂 +13 是妍子也是研子 2026-03-30 13/650 2026-03-30 18:01 by 小徐0109
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 压国家一区线,求导师收留,有恩必谢! +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
信息提示
请填处理意见