24小时热门版块排行榜    

查看: 13261  |  回复: 97
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

y383514131

银虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr该怎么做 已有25人参与

最近做菌落pcr总是做不出来,而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的,求做菌落pcr注意事项,细节,个人经验等

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
回复此楼
此事说来终觉浅,莫问出处便是真
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王方平

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我在此可以跟你讲一下我菌检的习惯:
1、在每个平板上挑多个(一般16个)单克隆分别分开接种至加有载体对应抗生素的500μL的LB培养液中,37℃220rpm振荡培养8—10h;
2、去培养物作为模板(这是一个筛选过程,培养后你会发现有的培养物浑浊,有的澄清,我们做pcr扩增是只选择浑浊的培养物),利用载体上的通用引物或者目的序列的特异引物进行PCR扩增。在进行PCR扩增时一般会做个对照,在对照实验中不加任何模版,扩增体系其他成分正常,以验证体系的影响。另预变性的时间要比普通PCR的预设时间长,便于细菌胞壁的破裂。
希望能够帮到你
97楼2017-02-01 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 98 个回答

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:22:42
xn8008: 应助指数+1 2017-01-12 08:22:55
挑菌的时候挑少点,不要太多,否则p出来

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

···
2楼2016-11-16 08:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙丹7780

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:24
挑菌使用镊子夹取10ul枪头挑菌 在配好体系的pcr管中沾1-2下即可
会不会是挑菌抠到太多培养基 实际上菌落并没有接触到管中的液体,你的pcr没有模板所以扩不出来

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2016-11-16 09:02:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

佳敏佳敏

新虫 (初入文坛)

菌不宜太多

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2016-11-16 09:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见