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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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y383514131

银虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr该怎么做 已有25人参与

最近做菌落pcr总是做不出来，而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的，求做菌落pcr注意事项，细节，个人经验等

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
1楼 2016-11-16 08:38:01
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王方平

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我在此可以跟你讲一下我菌检的习惯：
1、在每个平板上挑多个（一般16个）单克隆分别分开接种至加有载体对应抗生素的500μL的LB培养液中，37℃220rpm振荡培养8—10h；
2、去培养物作为模板（这是一个筛选过程，培养后你会发现有的培养物浑浊，有的澄清，我们做pcr扩增是只选择浑浊的培养物），利用载体上的通用引物或者目的序列的特异引物进行PCR扩增。在进行PCR扩增时一般会做个对照，在对照实验中不加任何模版，扩增体系其他成分正常，以验证体系的影响。另预变性的时间要比普通PCR的预设时间长，便于细菌胞壁的破裂。
希望能够帮到你
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97楼2017-02-01 16:47:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:22:42
xn8008: 应助指数+1 2017-01-12 08:22:55
挑菌的时候挑少点，不要太多，否则p出来
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y383514131
···
2楼2016-11-16 08:47:55
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孙丹7780

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:56:24
挑菌使用镊子夹取10ul枪头挑菌 在配好体系的pcr管中沾1-2下即可
会不会是挑菌抠到太多培养基 实际上菌落并没有接触到管中的液体，你的pcr没有模板所以扩不出来

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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y383514131
3楼2016-11-16 09:02:17
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佳敏佳敏

新虫 (初入文坛)
菌不宜太多

发自小木虫IOS客户端
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y383514131
4楼2016-11-16 09:15:27
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