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菌落pcr该怎么做 已有25人参与
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最近做菌落pcr总是做不出来，而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的，求做菌落pcr注意事项，细节，个人经验等 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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细菌涂板，长成单菌落之后，用灭菌的小枪头挑取单菌落，蘸在液体培养基里面吸打混匀，37℃，270r培养3小时，然后吸取一微升作为模板，pcr体系可以25微升，也可以50微升，体系里包括模板，引物，dntp，mg离子，k离子，酶，buffer等，看你是用单酶还是用MIX，如果用MIX的话很方便，推荐擎科生物公司的低盐金牌，菌p很给力，体系构成是，模板一微升，上下游引物各一微升，剩余用金牌MIX补齐就可以了，程序要看你引物的Tm值确定退火温度，延伸时间要看你片段大小，擎科的金牌mix延伸速度很快，5-10s/kb，短片段半个多小时就可以扩出来 发自小木虫IOS客户端 |
91楼2017-01-13 13:03:37
小冀-
版主 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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| 挑菌的时候挑少点，不要太多，否则p出来 |
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y3835141312楼2016-11-16 08:47:55
【答案】应助回帖
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挑菌使用镊子夹取10ul枪头挑菌 在配好体系的pcr管中沾1-2下即可 会不会是挑菌抠到太多培养基 实际上菌落并没有接触到管中的液体，你的pcr没有模板所以扩不出来 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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3楼2016-11-16 09:02:17
4楼2016-11-16 09:15:27