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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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dsten

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:58:53
我做菌液PCR的时候都是用的扩大培养之后的菌液  也不管菌多不多，反正在里面，不用像你们那样挑菌，每次扩出来的结果和提质粒扩的结果是类似的，所以楼主不用太关注在板子上挑菌来P的问题，那菌万一还有用呢  是吧，先扩大培养。
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y383514131
希望科研上有所建树，play science and make some interesting findings
31楼2016-11-18 13:31:48
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hattie919822

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:57:09
一般我都是在超净工作台里面，用10微升的墙头将菌落挑进去10微升的无菌水里面，混匀，肉眼可看见稍微浑浊，然后取1微升作为模板。
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不见不知不伴不惜不
32楼2016-11-18 16:52:52
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鱼》

新虫 (正式写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:23:37
不要浓度过高，不然不容易p

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33楼2016-11-18 17:10:24
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
31楼: Originally posted by dsten at 2016-11-18 13:31:48
我做菌液PCR的时候都是用的扩大培养之后的菌液  也不管菌多不多，反正在里面，不用像你们那样挑菌，每次扩出来的结果和提质粒扩的结果是类似的，所以楼主不用太关注在板子上挑菌来P的问题，那菌万一还有用呢  是吧， ...

谢谢指教

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
34楼2016-11-19 13:40:39
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察亚平

新虫 (小有名气)
可以先扩增一下，划个patch

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快乐每一天
35楼2016-11-20 18:36:53
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siyuansing

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 23:00:20
我都是挑菌到400ul的LB里，取1ul当做模板进行PCR，剩下的在37度培养。菌液PCR能做出来的再在试管培养，保种测序。菌液PCR能做出来的都有，做不出来的都没有。

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36楼2016-11-20 22:07:42
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caiying888

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

将你培养的菌落离心，去掉一半的上层培养液，再混匀，浓度高点再PCR，
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37楼2016-11-21 11:10:31
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xiaominzheng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:03:39
看大家好多都是用的枪头挑菌，小建议：用牙签的尖尖沾一下确定碰着菌就好，然后抖两下就可以了。

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y383514131
38楼2016-11-22 22:31:09
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaominzheng at 2016-11-22 22:31:09
看大家好多都是用的枪头挑菌，小建议：用牙签的尖尖沾一下确定碰着菌就好，然后抖两下就可以了。

格兰仕阳性菌也这么做吗

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
39楼2016-11-23 09:36:18
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-17 21:28:38
取单克隆到500UL LB里边儿摇3-4个小时，也可以多摇一会，浑浊了之后，在无菌工作台往10uL的体系里加1uL做PCR即可
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40楼2016-11-23 12:24:49
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