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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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ztt2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by y383514131 at 2016-11-16 08:38:01
最近做菌落pcr总是做不出来，而提基因组或提质粒后再进行pcr都是可以p出来的，求做菌落pcr注意事项，细节，个人经验等
youlinglyw

做菌液pcr啊，挑到EP管里,摇起来再用菌液鉴定。不用摇太浓，看到有就可以鉴定了。鉴定出来菌液就可以直接送测序了。

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11楼2016-11-16 13:30:03
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-17 21:26:47
10ul枪头挑菌，转移至10-15ul ddH2O，吹吸混匀，取1ul进行总体系为25ul的PCR...
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y383514131
12楼2016-11-16 13:56:31
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by ULYSSEESWB at 2016-11-16 13:56:31
10ul枪头挑菌，转移至10-15ul ddH2O，吹吸混匀，取1ul进行总体系为25ul的PCR...

我取10uldd水，混匀后并没有p出来，或许是我放的菌泥太多了

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
13楼2016-11-16 14:52:33
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zhangsuing
14楼2016-11-16 16:02:05
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by y383514131 at 2016-11-16 14:52:33
我取10uldd水，混匀后并没有p出来，或许是我放的菌泥太多了
...

菌有点就行，如果pcr体系肉眼看都浑浊就明显过量了，另外
95预变性至少5min以上吧
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y383514131
15楼2016-11-17 08:04:14
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y383514131

银虫 (小有名气)
★
送红花一朵
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-01-12 08:22:33
引用回帖:
15楼: Originally posted by ULYSSEESWB at 2016-11-17 08:04:14
菌有点就行，如果pcr体系肉眼看都浑浊就明显过量了，另外
95预变性至少5min以上吧...

我也在验证菌落量的问题，今天可以看结果了

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
16楼2016-11-17 08:19:33
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MeiPD

新虫 (小有名气)
学校一下，感谢分享

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17楼2016-11-17 08:49:00
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上官凤舞

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-23 22:04:08
阳性菌的话，需要破壁，加溶菌酶作用，或者反复沸水煮冰上冻，最后离心即可

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y383514131
18楼2016-11-17 08:49:37
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Inmybloom

铜虫 (小有名气)
挑菌的时候沾一下就可以了，基本上看不到的。也可以直接挑半个菌到pcr体系

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y383514131
哈哈哈哈
19楼2016-11-17 08:54:04
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by 上官凤舞 at 2016-11-17 08:49:37
阳性菌的话，需要破壁，加溶菌酶作用，或者反复沸水煮冰上冻，最后离心即可

这种方法也用了，只是没有离心。结果有的p出来有的没。不清楚离心是不是没p出来的原因

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
20楼2016-11-17 16:03:10
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