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y383514131

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by Inmybloom at 2016-11-17 08:54:04
挑菌的时候沾一下就可以了,基本上看不到的。也可以直接挑半个菌到pcr体系

挑的菌每次都不少,结果都不好!有没有百分之六十以上能p出来的方法

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此事说来终觉浅,莫问出处便是真
21楼2016-11-17 16:04:30
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C小杨

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:59:45
菌落PCR比菌液PCR更容易出现假阳性,建议使用菌液PCR,摇菌2ml,2-3小时加一微升作模板即可。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

22楼2016-11-17 17:20:43
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hubeigxkkk

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:57:44
说下个人经验。首先挑菌一定要找圆润的单菌落,用10ul枪头略微碰到菌落就可以(不能沾太多菌体),然后将枪头在PCR体系吹打几次。PCR程序我得预变性是94℃,5min。
23楼2016-11-17 17:33:59
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y383514131

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by C小杨 at 2016-11-17 17:20:43
菌落PCR比菌液PCR更容易出现假阳性,建议使用菌液PCR,摇菌2ml,2-3小时加一微升作模板即可。

下次就试你这个方法

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此事说来终觉浅,莫问出处便是真
24楼2016-11-17 17:50:42
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引用回帖:
10楼: Originally posted by zgs_2013 at 2016-11-16 13:04:00
挑菌落时选平皿上的单菌落,非常小的刚长出的那种,用无菌枪头刮下,放到10微升的无菌水搅拌,外观看起来稍微有点混浊。然后pcr时20微体系模板加1~5微就够了



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25楼2016-11-17 22:12:24
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wangxiao318

银虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:58:19
如果是平板,挑菌时沾一点就行,不要以肉眼看到作标准,预变性时间稍长些,以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液,最好是取新鲜的,生长状态最好时的,1微升足矣。另外,实验时加上对照,阴性的,阳性的,便于排查。

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26楼2016-11-18 08:15:56
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

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要等菌落长的大一点,再进行摇菌!你的体系是多少微的?
默默搜寻
27楼2016-11-18 08:23:44
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彭江容

新虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by wangxiao318 at 2016-11-18 08:15:56
如果是平板,挑菌时沾一点就行,不要以肉眼看到作标准,预变性时间稍长些,以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液,最好是取新鲜的,生长状态最好时的,1微升足矣。另外,实验时加上对照,阴性的,阳性的,便于排查。
...

怎么做阴性阳性对照啊?

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28楼2016-11-18 10:42:56
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xhhshx

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:59:20
就是枪头在菌落上蘸一下,再放进pcr体系里搅一搅,就可以了,但要注意枪头放进体系里会吸一点体系的溶液,会有损失
29楼2016-11-18 11:17:29
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sww米修米修

新虫 (初入文坛)

直接用小枪头点一下,然后在分好的体系里吹打就行了

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30楼2016-11-18 12:15:49
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