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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr该怎么做
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by Inmybloom at 2016-11-17 08:54:04
挑菌的时候沾一下就可以了，基本上看不到的。也可以直接挑半个菌到pcr体系

挑的菌每次都不少,结果都不好！有没有百分之六十以上能p出来的方法

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
21楼2016-11-17 16:04:30
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C小杨

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:59:45
菌落PCR比菌液PCR更容易出现假阳性，建议使用菌液PCR，摇菌2ml，2-3小时加一微升作模板即可。
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y383514131
22楼2016-11-17 17:20:43
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hubeigxkkk

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:57:44
说下个人经验。首先挑菌一定要找圆润的单菌落，用10ul枪头略微碰到菌落就可以（不能沾太多菌体），然后将枪头在PCR体系吹打几次。PCR程序我得预变性是94℃，5min。
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23楼2016-11-17 17:33:59
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y383514131

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by C小杨 at 2016-11-17 17:20:43
菌落PCR比菌液PCR更容易出现假阳性，建议使用菌液PCR，摇菌2ml，2-3小时加一微升作模板即可。

下次就试你这个方法

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
24楼2016-11-17 17:50:42
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snhajn
引用回帖:
10楼: Originally posted by zgs_2013 at 2016-11-16 13:04:00
挑菌落时选平皿上的单菌落，非常小的刚长出的那种，用无菌枪头刮下，放到10微升的无菌水搅拌，外观看起来稍微有点混浊。然后pcr时20微体系模板加1～5微就够了

对

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25楼2016-11-17 22:12:24
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wangxiao318

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:58:19
如果是平板，挑菌时沾一点就行，不要以肉眼看到作标准，预变性时间稍长些，以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液，最好是取新鲜的，生长状态最好时的，1微升足矣。另外，实验时加上对照，阴性的，阳性的，便于排查。

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26楼2016-11-18 08:15:56
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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要等菌落长的大一点，再进行摇菌！你的体系是多少微的？
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默默搜寻
27楼2016-11-18 08:23:44
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彭江容

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by wangxiao318 at 2016-11-18 08:15:56
如果是平板，挑菌时沾一点就行，不要以肉眼看到作标准，预变性时间稍长些，以你的菌种类型来定。如果是摇的菌液，最好是取新鲜的，生长状态最好时的，1微升足矣。另外，实验时加上对照，阴性的，阳性的，便于排查。
...

怎么做阴性阳性对照啊？

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28楼2016-11-18 10:42:56
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xhhshx

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-20 22:59:20
就是枪头在菌落上蘸一下，再放进pcr体系里搅一搅，就可以了，但要注意枪头放进体系里会吸一点体系的溶液，会有损失
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29楼2016-11-18 11:17:29
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sww米修米修

新虫 (初入文坛)
直接用小枪头点一下，然后在分好的体系里吹打就行了

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30楼2016-11-18 12:15:49
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