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luna跃儿弯弯

新虫 (小有名气)

[求助] Red重组时候为什么会出现两条条带? 已有2人参与

各位师兄师姐,我在做大肠杆菌的一个Red重组实验,敲除的目的基因是2400bp,用KANA作为抗性筛选,当目的基因与KANA抗性基因重组时,做菌落PCR,发现目的基因和KANA抗性基因条带都出现了,这是怎么回事?我接下来该如何处理呢?谢谢师兄师姐指点!不胜感激!
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luna跃儿弯弯

新虫 (小有名气)

跪求~~谁能帮帮忙啊~~
2楼2014-06-16 09:22:07
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沁荃

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个是因为菌落不纯,你再挑取这个菌落划线,得到的单克隆在PCR鉴定一下应该就不会有了~
3楼2014-06-25 14:07:49
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summermio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
luna跃儿弯弯(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:52:54
我遇到过相同的问题, 并且划取单菌落也无法解决。
鉴于检测引物应该没问题的话, 应该是在重组过程中发生了单交换,建议楼主不用再花心思解决了,还是继续做重组筛菌落比较靠谱
4楼2014-07-23 22:21:55
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