24小时热门版块排行榜    

查看: 1353  |  回复: 3

cyl-1

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于red重组的问题 已有1人参与

各位虫友大家好,最近在做red重组敲除沙门氏菌的两个基因,其中有一个已经做成功,另外一个在转入同源壁片段之后,在抗性板子上长出了几个斑,挑斑用抗性LB摇菌。在要敲除的基因两侧和内部分别设计两对引物进行pcr鉴定,这时奇怪的事发生了,在基因两侧设计的引物扩增出来两条带,一大一小,测序后大的一条为该目的基因序列,小的一条为抗性基因序列,为什么会发生这种事,抗性片段应该是交换上去了,不然在抗性板子上不会长,应该没有污染,每次都做了阴性对照,没有条带,而且后来用菌液划了两次抗性板子挑单菌落 纯化,但是还是扩展出来两条带,基本可以排除污染的可能。后来我在genebank上找了一下标准沙门的序列,没有多拷贝,到底是怎么回事???求高手指导。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)

内部的引物也扩出和野生株一样的条带

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-15 16:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poiu250

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:50
请问楼主知道,怎么利用设计引物,来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗?设计的原理是 什么?
3楼2016-10-22 13:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by poiu250 at 2016-10-22 13:24:31
请问楼主知道,怎么利用设计引物,来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗?设计的原理是 什么?

提取敲除了基因的小鼠基因组,在你敲除的基因两侧设计引物,pcr扩增然后测序比对就知道了

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-10-26 08:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cyl-1 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了? +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么? 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
请填处理意见