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关于red重组的问题已有1人参与
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各位虫友大家好，最近在做red重组敲除沙门氏菌的两个基因，其中有一个已经做成功，另外一个在转入同源壁片段之后，在抗性板子上长出了几个斑，挑斑用抗性LB摇菌。在要敲除的基因两侧和内部分别设计两对引物进行pcr鉴定，这时奇怪的事发生了，在基因两侧设计的引物扩增出来两条带，一大一小，测序后大的一条为该目的基因序列，小的一条为抗性基因序列，为什么会发生这种事，抗性片段应该是交换上去了，不然在抗性板子上不会长，应该没有污染，每次都做了阴性对照，没有条带，而且后来用菌液划了两次抗性板子挑单菌落 纯化，但是还是扩展出来两条带，基本可以排除污染的可能。后来我在genebank上找了一下标准沙门的序列，没有多拷贝，到底是怎么回事？？？求高手指导。 发自小木虫Android客户端 |
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