应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于red重组的问题
41/1返回列表
查看: 1276  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cyl-1

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于red重组的问题 已有1人参与

各位虫友大家好，最近在做red重组敲除沙门氏菌的两个基因，其中有一个已经做成功，另外一个在转入同源壁片段之后，在抗性板子上长出了几个斑，挑斑用抗性LB摇菌。在要敲除的基因两侧和内部分别设计两对引物进行pcr鉴定，这时奇怪的事发生了，在基因两侧设计的引物扩增出来两条带，一大一小，测序后大的一条为该目的基因序列，小的一条为抗性基因序列，为什么会发生这种事，抗性片段应该是交换上去了，不然在抗性板子上不会长，应该没有污染，每次都做了阴性对照，没有条带，而且后来用菌液划了两次抗性板子挑单菌落 纯化，但是还是扩展出来两条带，基本可以排除污染的可能。后来我在genebank上找了一下标准沙门的序列，没有多拷贝，到底是怎么回事？？？求高手指导。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-15 16:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)
内部的引物也扩出和野生株一样的条带

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-15 16:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poiu250

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:50
请问楼主知道，怎么利用设计引物，来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗？设计的原理是 什么？
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-22 13:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by poiu250 at 2016-10-22 13:24:31
请问楼主知道，怎么利用设计引物，来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗？设计的原理是 什么？

提取敲除了基因的小鼠基因组，在你敲除的基因两侧设计引物，pcr扩增然后测序比对就知道了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-10-26 08:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cyl-1 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭