应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于red重组的问题
41/1返回列表
查看: 1278  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cyl-1

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于red重组的问题 已有1人参与

各位虫友大家好，最近在做red重组敲除沙门氏菌的两个基因，其中有一个已经做成功，另外一个在转入同源壁片段之后，在抗性板子上长出了几个斑，挑斑用抗性LB摇菌。在要敲除的基因两侧和内部分别设计两对引物进行pcr鉴定，这时奇怪的事发生了，在基因两侧设计的引物扩增出来两条带，一大一小，测序后大的一条为该目的基因序列，小的一条为抗性基因序列，为什么会发生这种事，抗性片段应该是交换上去了，不然在抗性板子上不会长，应该没有污染，每次都做了阴性对照，没有条带，而且后来用菌液划了两次抗性板子挑单菌落 纯化，但是还是扩展出来两条带，基本可以排除污染的可能。后来我在genebank上找了一下标准沙门的序列，没有多拷贝，到底是怎么回事？？？求高手指导。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-15 16:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)
内部的引物也扩出和野生株一样的条带

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-15 16:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poiu250

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:50
请问楼主知道，怎么利用设计引物，来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗？设计的原理是 什么？
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-22 13:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyl-1

铜虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-26 08:39:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by poiu250 at 2016-10-22 13:24:31
请问楼主知道，怎么利用设计引物，来鉴定敲除10来个碱基的小鼠吗？设计的原理是 什么？

提取敲除了基因的小鼠基因组，在你敲除的基因两侧设计引物，pcr扩增然后测序比对就知道了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-10-26 08:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cyl-1 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[考博] 求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 297，工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211，22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭