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xmuwangym

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】咨询关于RED重组后重组子的鉴定问题 已有2人参与

本人刚开始用RED系统做重组,目前初步得到一些克隆,经抗性基因PCR鉴定能P出相应条带,但是还需要进一步验证重组发生的位置是否正确。文献上的做法是在同源序列的两端设计引物进行PCR鉴定,我用此方法进行但却始终未能P出理想条带。因而想咨询一下园子里的高手给支支招,是否有比较巧妙的方法进行重组子的鉴定。不胜感激!!!因为我还是个新手,没有太多的钱币发放给各位,在这里深感抱歉,以后有钱币了一定后面补上!谢谢各位!
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厚德载物
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hanjun80

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你括出的抗性片段可能是质粒上的
就是说,你转化的时候,可能有质粒污染
我笃信:人定胜天!
2楼2010-10-15 13:01:14
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以设计两对引物,一对是同源臂上游和抗性基因中间某一区域设为下游引物,第二对以3'端同源臂为下游,抗性基因中间某一区域找上游引物。这样应该就可以了
3楼2015-02-01 15:43:20
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