| 查看: 2034 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
饿的神啊新虫 (著名写手)
|
[求助]
酶切连接不成功 已有1人参与
|
||
|
我想构建一个发夹结构用于RNAi，把长片段插入T载体(下游引物上有ClaI酶切位点），然后通过XhoI和ClaI双酶切短片段（上游引物加了XhoI，下游引物加ClaI）和长片段质粒，NEB的内切酶，酶切了一个小时，然后胶回收，用的promega T4连接酶连接，室温2h，然后转化，可是筛选出来的都只有长片段，没有短片段，说明连接没成功，是哪里的问题呢？ 发夹结构是不是长片段用正向，短片段用反向插入的，不然接头对不上啊，但是没有成功？我怕自己搞错了方向，后来没有把短片段连T载体，直接把PCR产物胶回收后双酶切了，还是没有成功。我又把筛选的反向插入的长片段作为模板，扩增短片段，然后把PCR产物双酶切，可是还是不成功，到底是为什么啊 @youlinglyw @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有195人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切很近的酶切位点，总是切不成功，如何解决？
已经有19人回复
- 求助！！！双酶切连接不上这是为什么
已经有27人回复
- 用takara的NdeI和KpnI双酶切连接问题，一直连接不成功，求帮忙？
已经有8人回复
- 双酶切 连接转化问题
已经有3人回复
- 酶切 连接
已经有2人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
- 酶切连接 （难题一个接一个呀）
已经有17人回复
- 求助-Sac1和Spe1的双酶切连接
已经有13人回复
- 急求酶切，回收及连接详细操作步骤
已经有10人回复
- 很奇怪的酶切连接问题
已经有13人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 提质粒酶切
已经有12人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- 连接检测时双酶切总是切不开
已经有9人回复
- 连接产物酶切的一点问题
已经有12人回复
- 双酶切，切不下来
已经有19人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 单酶切连接注意事项及洋葱表皮转化试验
已经有3人回复
- XcmI酶切不开的可能原因
已经有8人回复
- 【原创】酶切连接转化个人经验，希望对大家有帮助
已经有67人回复
|
楼主，你好，我最近构建表达载体，也用到了和你的差不多的技术，我可以请教你一下吗？酶切之后连接完了不可以直接PCR验证吗？为什么还要做转化呢？是不是因为连接后的反应液太少，然后转化扩繁要增大量呢？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-10-22 21:59:59
饿的神啊
新虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5982.7
- 散金: 122
- 帖子: 1004
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 2477988
- 注册: 2013-05-23
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
2楼2016-10-13 11:32:25
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
3楼2016-10-13 12:00:53
bio转录组
金虫 (正式写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 1071.4
- 散金: 55
- 红花: 9
- 帖子: 605
- 在线: 58.9小时
- 虫号: 4513880
- 注册: 2016-03-17
- 性别: GG
- 专业: 动物遗传学
4楼2016-10-13 21:44:22