【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有195人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助：Xho 1 单酶切载体连接已经有19人回复
关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步已经有18人回复
（侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略已经有89人回复
酶切后未纯化连接出现的问题已经有18人回复
基因克隆中酶切连接问题已经有13人回复
单酶切连接的问题已经有4人回复
连接酶切问题已经有10人回复
PCR ，双酶切，连接问题已经有17人回复
连接体系的确定已经有19人回复
双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点已经有52人回复
【求助/交流】质粒双酶切连接问题已经有7人回复
【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题已经有12人回复
【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题已经有13人回复

1楼2012-09-22 00:39:07

QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 12
在线: 18.2小时
虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

MARKER: 4000 3000 2000 1200 800 500 200

2楼2012-09-22 00:42:42

ysn5048

银虫 (小有名气)

应助: 24 (小学生)
金币: 466.9
散金: 5
红花: 1
帖子: 231
在线: 35.3小时
虫号: 1963424
注册: 2012-08-30
性别: GG
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

有时候，一句话，可以改变未来

3楼2012-09-22 00:59:51

QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 12
在线: 18.2小时
虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

引用回帖:

3楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-22 00:59:51
楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

@ @
7条你看错了吧
…………

4楼2012-09-22 20:18:26

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

应助: 25 (小学生)
金币: 3171.1
散金: 10
红花: 2
帖子: 704
在线: 116.6小时
虫号: 880952
注册: 2009-10-22
专业: 检验医学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:23:27

嗯，可能你那个酶在载体上或者目的片段上还有其他的酶切位点吧？也有可能还有的没有切开，还是环状。你可以酶切之后，再跑一个质粒的，排除是不是酶切不完全的可能。
还有就是做菌落PCR时可以考虑做一个阴性对照。

5楼2012-09-23 11:00:14

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆不喜欢发脾气

MolEPI: 25
应助: 138 (高中生)
金币: 141.2
散金: 350
红花: 13
帖子: 536
在线: 313.2小时
虫号: 1099992
注册: 2010-09-15
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 欢迎回来 2012-09-24 10:23:47

嗯.................
   同意楼上童鞋方针
   1. 菌落PCR一定要有NTC
   2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
   3. 钱多并且嫌麻烦就测序给通用引物可以测出部分载体序列的
   4. 一定要确定酶的位点数再做说实话个人觉得 EcoRI和XhoI都算位点出现频率中上的酶了
   个人看法若有说错请高手指点

Let God do with it as He wills

6楼2012-09-23 11:31:21

wcwluwei

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:23:57

本帖内容被屏蔽

7楼2012-09-23 14:36:24

QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 12
在线: 18.2小时
虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

引用回帖:

5楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-09-23 11:00:14
嗯，可能你那个酶在载体上或者目的片段上还有其他的酶切位点吧？也有可能还有的没有切开，还是环状。你可以酶切之后，再跑一个质粒的，排除是不是酶切不完全的可能。
还有就是做菌落PCR时可以考虑做一个阴性对照。

菌落PCR 有阴性对照的跑胶出来的目的基因条带很清晰很亮。
我觉得可能是没切开。
我加大酶量再试试
只是刚好酶切用酶没有了，周末不送货。现在在等送货，真心焦。

8楼2012-09-24 12:07:00

QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 12
在线: 18.2小时
虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

引用回帖:

6楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-23 11:31:21
嗯.................
   同意楼上童鞋方针
   1. 菌落PCR一定要有NTC
   2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
   3. 钱多并且嫌麻烦就测序给通用引物可以测出部分载体序列的
   4. 一定要 ...

呃确实我在做质粒酶切电泳的时候没有做空白对照疏忽了

9楼2012-09-24 12:09:11

QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 12
在线: 18.2小时
虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

引用回帖:

7楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-09-23 14:36:24
lz不哭。。。
我看了下你的电泳图，你这个图基本确定应该是质粒的条带，目的条带没有切出来，首先有可能是这个质粒没有你的片段，还有可能就是你酶切时间或者体系出现问题了，找找原因。祝你成功

刚接触分子克隆
酶切系统的话问题应该不大是按试剂盒说明的那样做的量
不过我试试加大酶用量
另外再补个没有酶切的载体电泳做参照
这个质粒里目的基因片段肯定有的因为之前用的是阳性菌落PCR 之后提质粒之后也做了个PCR跑胶验证效果都不错
所以应该就单是酶切本身的问题

10楼2012-09-24 12:12:08