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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接产物酶切的一点问题

将连接产物做转化 进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性(跑出目的基因)的菌落 提质粒
之后 做的质粒PCR(空载体做验证)都很成功 目的基因条带很亮
载体5000 目的基因800
之后进行双酶切验证 结果切出了二/三条带 有约5000、4000、2000
不明白
是酶切 没切干净?
ECORI 2UL
XHO1 2UL
BUFFER H 4UL
模板 约1ug
ddH2O up to 40ul
37℃ 过夜

20120921
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-23 11:31:21
嗯.................
       同意楼上童鞋方针
       1. 菌落PCR一定要有NTC
       2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
       3. 钱多并且嫌麻烦就测序 给通用引物 可以测出部分载体序列的
       4. 一定要 ...

呃 确实我在做质粒酶切电泳的时候 没有做空白对照 疏忽了
9楼2012-09-24 12:09:11
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

MARKER: 4000 3000 2000 1200 800 500 200
2楼2012-09-22 00:42:42
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主的marker怎么只有六条带,可楼主提拱的数据是七个…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
有时候,一句话,可以改变未来
3楼2012-09-22 00:59:51
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-22 00:59:51
楼主的marker怎么只有六条带,可楼主提拱的数据是七个…

@ @  
7条 你看错了吧
…………
4楼2012-09-22 20:18:26
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