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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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虫号: 2001914
注册: 2012-09-14
专业: 临床兽医学

[求助] 连接产物酶切的一点问题

将连接产物做转化进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性（跑出目的基因）的菌落提质粒
之后做的质粒PCR（空载体做验证）都很成功目的基因条带很亮
载体5000 目的基因800
之后进行双酶切验证结果切出了二/三条带有约5000、4000、2000
不明白

？
是酶切没切干净？
ECORI 2UL
XHO1 2UL
BUFFER H 4UL
模板约1ug
ddH2O up to 40ul
37℃ 过夜

20120921

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1楼 2012-09-22 00:39:07

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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-23 11:31:21
嗯.................
   同意楼上童鞋方针
   1. 菌落PCR一定要有NTC
   2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
   3. 钱多并且嫌麻烦就测序给通用引物可以测出部分载体序列的
   4. 一定要 ...

呃确实我在做质粒酶切电泳的时候没有做空白对照疏忽了