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1楼2012-09-22 00:39:07

QUENIX2321

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2楼2012-09-22 00:42:42

ysn5048

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【答案】应助回帖

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楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

有时候，一句话，可以改变未来

3楼2012-09-22 00:59:51

QUENIX2321

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3楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-22 00:59:51
楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

@ @
7条你看错了吧
…………

4楼2012-09-22 20:18:26

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:23:27

嗯，可能你那个酶在载体上或者目的片段上还有其他的酶切位点吧？也有可能还有的没有切开，还是环状。你可以酶切之后，再跑一个质粒的，排除是不是酶切不完全的可能。
还有就是做菌落PCR时可以考虑做一个阴性对照。

5楼2012-09-23 11:00:14

atlanticwi

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嗯.................
   同意楼上童鞋方针
   1. 菌落PCR一定要有NTC
   2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
   3. 钱多并且嫌麻烦就测序给通用引物可以测出部分载体序列的
   4. 一定要确定酶的位点数再做说实话个人觉得 EcoRI和XhoI都算位点出现频率中上的酶了
   个人看法若有说错请高手指点

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6楼2012-09-23 11:31:21

wcwluwei

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7楼2012-09-23 14:36:24

QUENIX2321

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5楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-09-23 11:00:14
嗯，可能你那个酶在载体上或者目的片段上还有其他的酶切位点吧？也有可能还有的没有切开，还是环状。你可以酶切之后，再跑一个质粒的，排除是不是酶切不完全的可能。
还有就是做菌落PCR时可以考虑做一个阴性对照。

菌落PCR 有阴性对照的跑胶出来的目的基因条带很清晰很亮。
我觉得可能是没切开。
我加大酶量再试试
只是刚好酶切用酶没有了，周末不送货。现在在等送货，真心焦。

8楼2012-09-24 12:07:00

QUENIX2321

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6楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-23 11:31:21
嗯.................
   同意楼上童鞋方针
   1. 菌落PCR一定要有NTC
   2. 质粒酶切一定要有原质粒电泳对照
   3. 钱多并且嫌麻烦就测序给通用引物可以测出部分载体序列的
   4. 一定要 ...

呃确实我在做质粒酶切电泳的时候没有做空白对照疏忽了

9楼2012-09-24 12:09:11

QUENIX2321

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7楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-09-23 14:36:24
lz不哭。。。
我看了下你的电泳图，你这个图基本确定应该是质粒的条带，目的条带没有切出来，首先有可能是这个质粒没有你的片段，还有可能就是你酶切时间或者体系出现问题了，找找原因。祝你成功

刚接触分子克隆
酶切系统的话问题应该不大是按试剂盒说明的那样做的量
不过我试试加大酶用量
另外再补个没有酶切的载体电泳做参照
这个质粒里目的基因片段肯定有的因为之前用的是阳性菌落PCR 之后提质粒之后也做了个PCR跑胶验证效果都不错
所以应该就单是酶切本身的问题

10楼2012-09-24 12:12:08