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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接产物酶切的一点问题

将连接产物做转化 进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性（跑出目的基因）的菌落 提质粒
之后 做的质粒PCR（空载体做验证）都很成功 目的基因条带很亮
载体5000 目的基因800
之后进行双酶切验证 结果切出了二/三条带 有约5000、4000、2000
不明白？
是酶切 没切干净？
ECORI 2UL
XHO1 2UL
BUFFER H 4UL
模板 约1ug
ddH2O up to 40ul
37℃ 过夜

20120921
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1楼 2012-09-22 00:39:07
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-09-23 11:00:14
嗯，可能你那个酶在载体上或者目的片段上还有其他的酶切位点吧？也有可能还有的没有切开，还是环状。你可以酶切之后，再跑一个质粒的，排除是不是酶切不完全的可能。
还有就是做菌落PCR时可以考虑做一个阴性对照。

菌落PCR 有阴性对照的 跑胶出来的目的基因条带很清晰很亮。
我觉得可能是没切开。
我加大酶量 再试试
只是刚好酶切用酶没有了，周末不送货。现在在等送货，真心焦。
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8楼2012-09-24 12:07:00
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)
MARKER: 4000 3000 2000 1200 800 500 200
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2楼2012-09-22 00:42:42
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
有时候，一句话，可以改变未来
3楼2012-09-22 00:59:51
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-22 00:59:51
楼主的marker怎么只有六条带，可楼主提拱的数据是七个…

@ @  
7条 你看错了吧
…………
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-22 20:18:26
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