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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接产物酶切的一点问题
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据你的电泳图应该是没切开，最大的那个像是单切的产物，而且还留有没切动的质粒条带。试试做单酶切对照，可能有一个酶活性有问题了。
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11楼2012-09-24 16:10:13
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-25 14:28:08
1、你酶切时间过长。建议2.5--3h
2、做个单酶切，看看是不是酶的问题。
3、酶切体系加大模版的量。如果是20的体系，直接就加入12的模版。
4、祝你好运
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任重道远……
12楼2012-09-24 17:56:39
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫啊 2012-09-25 14:28:30
QUENIX2321: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-08 14:06:34
1：姑娘，首先告诉你菌落PCR是我见过的所有验证方法里面最不靠谱的……本人深有体会，最多只能做个初筛，验证准确还得看酶切
2：既然都做双酶切了，何不对照做两个单酶切，这样分析结果岂不是好一点？
3：另外还有一个对照问题，楼上的同学也提到了，一般酶切实验我是这样安排泳道的
1：Marker
2：未酶切对照质粒
3：单酶切
4：另一条单酶切
5：双酶切
4：另外，你这种情况，按道理有多余的酶切位点也只是你目的片段切碎了，只会出现800bp以下的条带，载体怎么会切碎，一般载体上相同酶切位点就一个，所以还是怀疑你的酶切操作或者体系反应时间的问题.
5：酶量不能过多，过多加星，会切弥散
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
13楼2012-09-25 09:07:33
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