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连接产物酶切的一点问题
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将连接产物做转化 进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性（跑出目的基因）的菌落 提质粒 之后 做的质粒PCR（空载体做验证）都很成功 目的基因条带很亮 载体5000 目的基因800 之后进行双酶切验证 结果切出了二/三条带 有约5000、4000、2000 不明白  ？是酶切 没切干净？ ECORI 2UL XHO1 2UL BUFFER H 4UL 模板 约1ug ddH2O up to 40ul 37℃ 过夜   20120921 |
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Marado
金虫 (正式写手)
Dreamer
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫啊 2012-09-25 14:28:30
QUENIX2321: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-08 14:06:34
小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫啊 2012-09-25 14:28:30
QUENIX2321: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-08 14:06:34
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1：姑娘，首先告诉你菌落PCR是我见过的所有验证方法里面最不靠谱的……本人深有体会，最多只能做个初筛，验证准确还得看酶切 2：既然都做双酶切了，何不对照做两个单酶切，这样分析结果岂不是好一点？ 3：另外还有一个对照问题，楼上的同学也提到了，一般酶切实验我是这样安排泳道的 1：Marker 2：未酶切对照质粒 3：单酶切 4：另一条单酶切 5：双酶切 4：另外，你这种情况，按道理有多余的酶切位点也只是你目的片段切碎了，只会出现800bp以下的条带，载体怎么会切碎，一般载体上相同酶切位点就一个，所以还是怀疑你的酶切操作或者体系反应时间的问题. 5：酶量不能过多，过多加星，会切弥散 |
13楼2012-09-25 09:07:33
2楼2012-09-22 00:42:42
3楼2012-09-22 00:59:51
4楼2012-09-22 20:18:26