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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 连接产物酶切的一点问题

将连接产物做转化进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性（跑出目的基因）的菌落提质粒
之后做的质粒PCR（空载体做验证）都很成功目的基因条带很亮
载体5000 目的基因800
之后进行双酶切验证结果切出了二/三条带有约5000、4000、2000
不明白

？
是酶切没切干净？
ECORI 2UL
XHO1 2UL
BUFFER H 4UL
模板约1ug
ddH2O up to 40ul
37℃ 过夜

20120921

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1楼 2012-09-22 00:39:07

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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-09-23 14:36:24
lz不哭。。。
我看了下你的电泳图，你这个图基本确定应该是质粒的条带，目的条带没有切出来，首先有可能是这个质粒没有你的片段，还有可能就是你酶切时间或者体系出现问题了，找找原因。祝你成功

刚接触分子克隆
酶切系统的话问题应该不大是按试剂盒说明的那样做的量
不过我试试加大酶用量
另外再补个没有酶切的载体电泳做参照
这个质粒里目的基因片段肯定有的因为之前用的是阳性菌落PCR 之后提质粒之后也做了个PCR跑胶验证效果都不错
所以应该就单是酶切本身的问题