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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接产物酶切的一点问题

将连接产物做转化 进行菌落PCR 将PCR鉴定阳性(跑出目的基因)的菌落 提质粒
之后 做的质粒PCR(空载体做验证)都很成功 目的基因条带很亮
载体5000 目的基因800
之后进行双酶切验证 结果切出了二/三条带 有约5000、4000、2000
不明白
是酶切 没切干净?
ECORI 2UL
XHO1 2UL
BUFFER H 4UL
模板 约1ug
ddH2O up to 40ul
37℃ 过夜

20120921
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-09-23 14:36:24
lz不哭。。。
我看了下你的电泳图,你这个图基本确定应该是质粒的条带,目的条带没有切出来,首先有可能是这个质粒没有你的片段,还有可能就是你酶切时间或者体系出现问题了,找找原因。祝你成功

刚接触分子克隆
酶切系统的话 问题应该不大 是按试剂盒说明的那样做的量
不过我试试加大酶用量
另外再补个没有酶切的载体电泳做参照
这个质粒里 目的基因片段 肯定有的 因为之前用的是阳性菌落PCR 之后提质粒之后 也做了个PCR跑胶验证 效果都不错
所以应该就单是酶切本身的问题
10楼2012-09-24 12:12:08
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

MARKER: 4000 3000 2000 1200 800 500 200
2楼2012-09-22 00:42:42
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主的marker怎么只有六条带,可楼主提拱的数据是七个…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
有时候,一句话,可以改变未来
3楼2012-09-22 00:59:51
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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-22 00:59:51
楼主的marker怎么只有六条带,可楼主提拱的数据是七个…

@ @  
7条 你看错了吧
…………
4楼2012-09-22 20:18:26
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