应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物做酶切
51/1返回列表
查看: 3064  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物做酶切 已有2人参与

PCR产物片段大小是745bp，要做的是通过酶切分基因型，不同的酶切结果对应不同的基因型。酶切后共有三种基因型，第一种是酶切后两条带，528和217；第二种是三条带，745，528和217；第三种是一条带，745。现在酶切结果最多的时候能出现五条带，分别在1000左右、745、528、500左右、217。用的酶是thermo的Apa I.PCR体系是15微升，之后直接加0.5微升的酶和1微升的buffer,酶切3小时。哪位大神能赐教一下这是怎么个情况？之前做的都没有出现这种情况，酶切之后条带怎么会变大呢？？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-05-09 16:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-10 00:15:38
以后遇到这种酶切问题直接将PCR产物稀释两倍进行酶切，即内切酶+buffer+水配2X mix，一般可以保证排除PCR产物影响酶切的可能。酶切时间稍微控制一下，比如1hr（好像ApaI易失活，多了也没用，半衰期30min ??），至于 ...

左边图片是PCR产物7.5微升加水7.5微升混匀，加0.5微升 Apa I，1微升 buffer酶切。四个样一组，共16个不同的样品。酶切时间从左到右依次1H，1.5H，2H，2.5H。右边图片是别人做的，就按照右图进行分型。我想问一下，酶切时间多久比较合适？怎么确定酶切是否完全呢？（GG型如果没有酶切完全的话是三条带，酶切完全的GT也是三条带）
PCR产物做酶切


PCR产物做酶切-1



发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-05-11 17:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能PCR产物不纯。
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-09 16:38:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 16:38:10
有可能PCR产物不纯。

我做过PCR产物直接跑胶，条带是单一的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-09 17:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
那就不知道了，很诡异的结果。
赞一下 回复此楼
4楼2016-05-09 18:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭