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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长bp的片段的连接问题。
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leisure93

新虫 (初入文坛)

[求助] 长bp的片段的连接问题。 已有3人参与

目的基因片段长度11kb左右。为了把他扩出来 分成了三段。part-1.2.3。part-1前段加入启动子。末端加了三个酶切位点。在part-2中加了几个内含子。part-3加了个荧光蛋白。现在part1.2.3都扩出来了，也验证过了，本来是想part-1.和part-2先连接后和part3连接。可是part1.2的连接一直不成功。导致实验没法继续进行，选用的是T-1载体。其中一些假阳性 连接时长 等问题都排除过了，也换过短的质粒 一直没能连接成功。重新加酶切位点也不太可能了，求助是不是长bp的片段链接应该需要注意什么？ part1.2.3的长度大约在2700 4000 4400左右。求助啊

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-05-01 20:48:37
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sloop112

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2016-05-05 10:33:02
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