| 查看: 1466 | 回复: 10 | ||
koreyoshitan金虫 (初入文坛)
|
[求助]
有关连接转化问题，求大神指导！！快来救救菜鸟吧。 已有1人参与
|
| 我扩了两个片段，分A为4Kb,B为3.8Kb的，想把它们俩连接到PMD18-T中，用的是TAKARA的SolutionⅠ，T4也用过，连接后转化，A片段不长斑，B片段长斑正常。但用菌液PCR和提质粒，最后B片段的大小均为2000bp左右，我想问这是什么情况？不长斑？长得斑片段大小不对……纠结死了！求大神解救。 |
回复此楼» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求大神帮忙分析一下这些透射图。。。菜鸟级别，越通俗易懂越好。多谢！
已经有7人回复
- 菜鸟请教各位大神关于本科diffusion基础Fick second Law的一个推论 顺
已经有14人回复
- 本人谱图菜鸟，各位大神帮帮我解析一下是不是目标化合物，非常感谢！急
已经有11人回复
- 核磁图谱分析，研一菜鸟求大神指教（小弟初来乍到，第一次发帖，没什么金币，求谅解）
已经有5人回复
- 有机菜鸟，对质谱不太了解，刚做的质谱图，求大神帮忙解析
已经有9人回复
- 菜鸟求助，老师给了一个分子让优化，可总是错误，求大神指点
已经有22人回复
- 菜鸟学习 python，求大神给点建议
已经有11人回复
- 编程菜鸟求大神引导入门。
已经有14人回复
- 菜鸟求助！！怎么用Delphi做一个信息管理系统，具体的步骤，跪求大神给我搭个框架
已经有4人回复
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
koreyoshitan: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-05 14:57:41
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-05 17:19:39
koreyoshitan: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-06 09:19:52
感谢参与，应助指数 +1
koreyoshitan: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-05 14:57:41
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-05 17:19:39
koreyoshitan: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-06 09:19:52
|
按照摩尔比（载体和片段1:3）好好的计算一下，4kb连接到2.7kb的PMD18 载体里 如果载体加0.5ul（25ng）l的话，总的片段浓度就需要113ng, 3.8kb的差不多也要那个浓度， B片段你可以用M13通用引物进行扩增，比你要的要大150bp左右，如果扩增出来还是2000多，那么你这个片段就没连接上去， 另外，不确定你用的什么不是加A尾的酶，用高保真的酶扩增的话要添加A尾。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
koreyoshitan
2楼2014-09-05 09:18:27
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2014-09-05 09:20:47
koreyoshitan
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 761
- 帖子: 26
- 在线: 10.7小时
- 虫号: 2736121
- 注册: 2013-10-19
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤诊断
4楼2014-09-05 14:57:23
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
5楼2014-09-05 15:22:07
koreyoshitan
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 761
- 帖子: 26
- 在线: 10.7小时
- 虫号: 2736121
- 注册: 2013-10-19
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤诊断
6楼2014-09-06 09:19:41
koreyoshitan
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 761
- 帖子: 26
- 在线: 10.7小时
- 虫号: 2736121
- 注册: 2013-10-19
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤诊断
7楼2014-09-10 09:34:40
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
8楼2014-09-10 09:55:30
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:16:19
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:16:19
| 好好看下。 |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : pGEM-T中文说明书.pdf
2014-09-10 09:55:38, 464.85 K
9楼2014-09-10 09:56:10
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
10楼2014-09-10 09:57:36