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王娜dada

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。 已有2人参与

目的片段和载体连接过夜之后转入TOP10感受态细胞，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落····

载体是ppink-α-HC，7Kb，目的片段大概800bp。目的片段和载体是用stuⅠ和kpnⅠ-HF双酶切处理过的。图20150330-3的两个带是两条目的片段回收之后的电泳图，上样量2μl。
图20150307-1的1号泳道是载体酶切之后的条带。
我的连接体系是20μl，T4：1μl，buffer：2μl，目的片段：10μl，载体：1μl，ddH2O：6μl。16℃连接过夜之后取10μl转入200μl TOP10感受态细胞，再加入800μl LB培养基，摇培45min后，取100μl菌液，用300μl LB稀释之后涂在LB-Amp培养基上，长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落····
感受态细胞我还做过其他实验，转入质粒之后可以正常长出单菌落，所以应该不是感受态的问题。

所以我想问问这种情况是出现了什么问题导致的，该怎么解决？多谢！

连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。
20150307-1.jpg


连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。-1
20150330-3 拷贝.jpg
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选择了，就走下去。
1楼 2015-04-03 10:59:29
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王娜dada: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-03 15:02:39
建议，以后做实验时候，记得做阴性及阳性空白样，否则很多时候针对错误的实验结果只能靠猜。这个情况，不能排除染菌的问题，当然，如果你的感受态效率高到离谱的程度，也可能会有这种现象，我不大看好这种可能。个人认为，感受态或者平板染菌可能性大。因为你没做阴性、阳性对照，所以，只能是可能。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2015-04-03 11:20:57
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到一样的问题，最后发现是我的氨苄失效了，所以你重新用别的氨苄试试，希望有用
赞一下 回复此楼
我的一生最美好的场景就是遇见你
3楼2015-04-03 14:59:53
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