应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。
31/1返回列表
查看: 3078  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

王娜dada

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。 已有2人参与

目的片段和载体连接过夜之后转入TOP10感受态细胞，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落····

载体是ppink-α-HC，7Kb，目的片段大概800bp。目的片段和载体是用stuⅠ和kpnⅠ-HF双酶切处理过的。图20150330-3的两个带是两条目的片段回收之后的电泳图，上样量2μl。
图20150307-1的1号泳道是载体酶切之后的条带。
我的连接体系是20μl，T4：1μl，buffer：2μl，目的片段：10μl，载体：1μl，ddH2O：6μl。16℃连接过夜之后取10μl转入200μl TOP10感受态细胞，再加入800μl LB培养基，摇培45min后，取100μl菌液，用300μl LB稀释之后涂在LB-Amp培养基上，长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落····
感受态细胞我还做过其他实验，转入质粒之后可以正常长出单菌落，所以应该不是感受态的问题。

所以我想问问这种情况是出现了什么问题导致的，该怎么解决？多谢！

连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。
20150307-1.jpg


连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。-1
20150330-3 拷贝.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
选择了，就走下去。
1楼 2015-04-03 10:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王娜dada: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-03 15:02:39
建议，以后做实验时候，记得做阴性及阳性空白样，否则很多时候针对错误的实验结果只能靠猜。这个情况，不能排除染菌的问题，当然，如果你的感受态效率高到离谱的程度，也可能会有这种现象，我不大看好这种可能。个人认为，感受态或者平板染菌可能性大。因为你没做阴性、阳性对照，所以，只能是可能。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2015-04-03 11:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雾里看花花开

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到一样的问题，最后发现是我的氨苄失效了，所以你重新用别的氨苄试试，希望有用
赞一下 回复此楼
我的一生最美好的场景就是遇见你
3楼2015-04-03 14:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王娜dada 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +3 032500 2026-03-25 3/150 2026-03-25 18:36 by haxia
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 6/300 2026-03-25 18:20 by xcjcqu
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 303求调剂 +3 蓝山月 2026-03-25 3/150 2026-03-25 10:04 by 雾散后相遇lc
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭