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连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。 已有2人参与
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目的片段和载体连接过夜之后转入TOP10感受态细胞，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落···· 载体是ppink-α-HC，7Kb，目的片段大概800bp。目的片段和载体是用stuⅠ和kpnⅠ-HF双酶切处理过的。图20150330-3的两个带是两条目的片段回收之后的电泳图，上样量2μl。 图20150307-1的1号泳道是载体酶切之后的条带。 我的连接体系是20μl，T4：1μl，buffer：2μl，目的片段：10μl，载体：1μl，ddH2O：6μl。16℃连接过夜之后取10μl转入200μl TOP10感受态细胞，再加入800μl LB培养基，摇培45min后，取100μl菌液，用300μl LB稀释之后涂在LB-Amp培养基上，长出来的不是单菌落，是一层菌膜·····根本没有单菌落···· 感受态细胞我还做过其他实验，转入质粒之后可以正常长出单菌落，所以应该不是感受态的问题。 所以我想问问这种情况是出现了什么问题导致的，该怎么解决？多谢！  20150307-1.jpg  20150330-3 拷贝.jpg |
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