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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段连接问题
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段连接问题 已有3人参与

通过克隆得到一个大约5.5k的片段，可是一直跟载体连不上，载体使用的是PEASY-Blunt，可是最后检测是空载，怎么解决呢？要不要换载体？

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1楼 2016-03-25 09:23:23
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 09:34:19
你是如何验证是空载的呢

蓝白斑板挑菌后提质粒后酶切检测的，载体大约是4k，只有载体条带，没有目的片段的条带

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4楼2016-03-25 09:37:17
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 09:43:19
目的片段的扩增产物是否为平端高宝真酶做的？
...

嗯嗯，是的

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6楼2016-03-25 09:46:41
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7楼: Originally posted by hua_geduo at 2016-03-25 10:01:58
调整下片段和载体的比例试试

正在尝试，同时问了他们的技术支持，建议更换载体

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8楼2016-03-25 10:14:54
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by hua_geduo at 2016-03-25 10:22:15
嗯，毕竟你的片段比较大，比载体都大了，需要一个能容纳大片段的载体...

嗯嗯，因为还是研一，对什么都不太懂，什么都在摸索过程中

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11楼2016-03-25 10:40:18
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想不通的猴子

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10楼: Originally posted by 王爱沫1 at 2016-03-25 10:24:33
你可以先看看参考文献，看一下你做的和参考文献上有何不同，再仔细检查一下你的实验步骤，这些都是很重要的。

嗯嗯，也是

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12楼2016-03-25 10:41:36
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-25 16:53:24
换载体比较好，BLUNT适合2000-3000左右的长片段，太长的就很容易连不上。

嗯嗯，已经咨询技术支持，他建议用Blunt-ZERO的载体

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16楼2016-03-25 22:52:42
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-03-25 15:29:04
建议楼主去图书馆借一本介绍载体的书，我记得很多都有载体适合插入片段大小的介绍

好哒，如果参考载体不可以我就去查阅一下啦

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17楼2016-03-25 22:53:46
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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15楼: Originally posted by wxb2061 at 2016-03-25 17:19:48
我最近在连接一个5000左右的片段到pet24b，总是连不进去

你说的这个载体不清楚呢，哪个公司的呢？目的片段也是平末端？

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18楼2016-03-25 22:54:23
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
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19楼: Originally posted by wncgliu86 at 2016-03-27 01:30:12
infusion cloning

哦哦，听说过，不过实验室都不用那个，据说太贵了

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20楼2016-03-27 15:07:13
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