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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 大片段转化问题,请教有经验的高手

insert 6.3kb,vector 14.5kb,连接摩尔浓度比5:1,感受态没有问题!转化后第二天长了单克隆,有的比较大,有的比较小,我挑了十个都是大菌落,小提后鉴定了下,没有一个是对的,粗略估计提出来的质粒只有2kb,不知道问题出在哪里?请高手解答!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是做的电转化吧?如果是热激,太大的进不去。
2楼2012-12-03 04:03:36
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的感受态是什么菌株啊?可以多试几个摩尔浓度,1:3  1:5
3楼2012-12-03 10:14:44
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为啥是5:1,确定连上了吗?
4楼2012-12-03 16:41:31
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雄鹰飞翔

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大片段,最好是电击转化,效果会更好!
5楼2013-01-06 14:56:50
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zhang@

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1)大片段应该用热击
2)比例3:1
3)挑菌时挑长的小的菌落:外源DNA插入后,会抑制质粒的生长,小的菌落才有大的可能性。
努力
6楼2013-01-12 18:06:24
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