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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大片段转化问题，请教有经验的高手
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 大片段转化问题，请教有经验的高手

insert 6.3kb，vector 14.5kb，连接摩尔浓度比5：1，感受态没有问题！转化后第二天长了单克隆，有的比较大，有的比较小，我挑了十个都是大菌落，小提后鉴定了下，没有一个是对的，粗略估计提出来的质粒只有2kb，不知道问题出在哪里？请高手解答！
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1楼 2012-12-02 14:10:13
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zhang@

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1）大片段应该用热击
2）比例3：1
3）挑菌时挑长的小的菌落：外源DNA插入后，会抑制质粒的生长，小的菌落才有大的可能性。
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努力
6楼2013-01-12 18:06:24
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