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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】请教BL21转化问题
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大傻妞

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教BL21转化问题

请问在转化的时候，我忘记冰浴20min了，直接将感受态和质粒混在一起热激了，怎么办？会对结果有影响吗？
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1楼 2011-03-28 14:22:26
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roomofxw

木虫 (正式写手)
大傻妞(金币+1): 2011-03-28 14:32:19
已然这样了，还能怎么办，要不直接往下做呗，要不再冰冰再热激
大约是影响转化率吧，表达嘛，能转出来几个就够用了
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2楼2011-03-28 14:30:34
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 大傻妞 at 2011-03-28 14:22:26:
请问在转化的时候，我忘记冰浴20min了，直接将感受态和质粒混在一起热激了，怎么办？会对结果有影响吗？

没问题。大肠杆菌伤得起。我们曾经75℃热激都能用，照样长。
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3楼2011-03-28 15:44:58
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chinosaur

木虫 (正式写手)
大傻妞(金币+1): 呵呵，谢谢～虽然错误是经验但以后还是要按规矩来～ 2011-03-29 21:38:20
如果你不是要追求高转化率的话，根本没问题，只有有一个菌转进去了就可以。
我曾经不热激就涂板，一样长了很多斑，我的根据是天根的试剂盒说明书上说，感受态和质粒混合后室温放半个小时也能得到一定的转化效果。
我还有过大量扩增DNA的经历，方法是等OD到0.6的时候把温度调到42度摇过夜，第二天菌体超级的浓，DNA产量有十几毫克每升。
大肠杆菌很皮实的，怎么搞都可以。
当然，最好还是严格按程序来做，这是最基本的
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4楼2011-03-28 22:00:28
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