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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大片段转化问题，请教有经验的高手
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 大片段转化问题，请教有经验的高手

insert 6.3kb，vector 14.5kb，连接摩尔浓度比5：1，感受态没有问题！转化后第二天长了单克隆，有的比较大，有的比较小，我挑了十个都是大菌落，小提后鉴定了下，没有一个是对的，粗略估计提出来的质粒只有2kb，不知道问题出在哪里？请高手解答！
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1楼 2012-12-02 14:10:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是做的电转化吧？如果是热激，太大的进不去。
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2楼2012-12-03 04:03:36
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的感受态是什么菌株啊?可以多试几个摩尔浓度，1:3  1:5
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3楼2012-12-03 10:14:44
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为啥是5:1，确定连上了吗？
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4楼2012-12-03 16:41:31
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雄鹰飞翔

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大片段，最好是电击转化，效果会更好！
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5楼2013-01-06 14:56:50
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zhang@

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1）大片段应该用热击
2）比例3：1
3）挑菌时挑长的小的菌落：外源DNA插入后，会抑制质粒的生长，小的菌落才有大的可能性。
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努力
6楼2013-01-12 18:06:24
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