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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段连接问题
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段连接问题 已有3人参与

通过克隆得到一个大约5.5k的片段，可是一直跟载体连不上，载体使用的是PEASY-Blunt，可是最后检测是空载，怎么解决呢？要不要换载体？

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1楼 2016-03-25 09:23:23
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
你是如何检测的呢？

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2楼2016-03-25 09:33:48
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
你是如何验证是空载的呢

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3楼2016-03-25 09:34:19
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 09:34:19
你是如何验证是空载的呢

蓝白斑板挑菌后提质粒后酶切检测的，载体大约是4k，只有载体条带，没有目的片段的条带

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4楼2016-03-25 09:37:17
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 想不通的猴子 at 2016-03-25 09:37:17
蓝白斑板挑菌后提质粒后酶切检测的，载体大约是4k，只有载体条带，没有目的片段的条带
...

目的片段的扩增产物是否为平端高宝真酶做的？

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5楼2016-03-25 09:43:19
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 09:43:19
目的片段的扩增产物是否为平端高宝真酶做的？
...

嗯嗯，是的

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6楼2016-03-25 09:46:41
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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调整下片段和载体的比例试试
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7楼2016-03-25 10:01:58
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想不通的猴子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hua_geduo at 2016-03-25 10:01:58
调整下片段和载体的比例试试

正在尝试，同时问了他们的技术支持，建议更换载体

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8楼2016-03-25 10:14:54
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hua_geduo

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 想不通的猴子 at 2016-03-25 10:14:54
正在尝试，同时问了他们的技术支持，建议更换载体
...

嗯，毕竟你的片段比较大，比载体都大了，需要一个能容纳大片段的载体
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9楼2016-03-25 10:22:15
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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10楼2016-03-25 10:24:33
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