小木虫

楼主最近用bl21(de3)表达一个含有连续脯氨酸的蛋白的时候发现，一经iptg诱导，相比于不诱导会生长的很差，蛋白电泳显示也没有我的目的蛋白，把这两个脯氨酸用pcrp掉之后又表达正常了，有虫友遇到这种情况吗？网上也没有这种情况报道呢……

大家好，我最近想构建一个基因的过表达载体。从CDS中PCR该基因（3100bp)，条带单一，大小正确，回收的基因片段测通，序列正确。但是我用同源重组的方式，将基因片段连接到慢病毒载体上，转化后酶切验证，发现插入片段只有1000bp左右，测序也发现中间有2000...

想构建2个蛋白在pet28a载体上。序列大概是：T7启动子——RBS——第一个蛋白（有终止密码子）——78bp（血清酶切割位点和T7tag）——第二个蛋白（有终止密码子）第二个蛋白前是没有RBS的请问这样第二个蛋白能正常表达吗？还是第二个蛋白表达量会少一点？还...

各位虫友，本人想用两种敲除小鼠杂交繁殖，构建双敲除小鼠，不知群里是否有这方面经验的朋友，求指教，定重谢，我的QQ1126372680

连接转化的时候，质粒酶切后，去磷酸化吧什么都不长，不去磷酸化吧长不少全自连。做了3多个月了，都是这个结果。所有试剂材料都排除过，没有问题。请问大侠们有没有好建议啊！！！！

请教下大家，TGF-β/SMAD3/胶原蛋白这个通路中，上游TGF-β↑/中游SMAD3不变→/下游胶原↓，这该怎么解释得通呢？在努力憋讨论

本人的实验需要乳酸乳球菌NZ3900与质粒pNZ8491，哪位大神手上有可以赠送或者交换或者购买吗，请答复或私聊我，谢谢！！

请问大家用ThT检测淀粉样多肽聚集的实验中，在多肽发生聚集后，为什么ThT的荧光信号会忽升忽降(如图所示)，而不是保持稳定？ThT荧光信号增长至一定值后，出现大幅度的振荡(从几百到五六千)。我的反应体系是150uL,使用的多肽浓度是5uM,ThT浓度是20uM...

大家好，我是从事分子生物学的，最近准备去新公司，给我的任务是查找市面上Taq酶的种类，这个很好查找，但是要找到销量比较高的公司，这个比较难，我在百度上查找一番没有找到，有知道的大神吗？急需急需，另外我还想咨询一下，现在市面上做的Taq酶是含有832个氨基酸的那...

青云瑞晶的结构解析平台自拥有MicroED专用的透射电子显微镜、蛋白质表达纯化、结晶等一批先进实验室设备。'https://www.readcrystal.com/'公司目前有实习的职位，欢迎感兴趣的同学加入，实习完后，双方满意的话可以留在公司继续发展。实习岗...

研究一个药物对细胞信号通路的调控作用，如果对具体信号不是很清楚，这个时候从组学入手，是应该先进行转录组学开始研究吗？

请问同一个基因的geneid和genebank号有什么区别？为什么要用两个？如何选用呢？比如genebank:NR_027341和geneID:158314

想问大家一个问题，A是转录因子，B是与其互作的下游靶基因。。那么，我想问，做A的过表达或沉默株系，B的表达量一定会发生变化的，是吗？那么这种变化是如何的，A过表达，B表达量提高还是下降；A沉默，B表达量提高还是下降？我还想问，做B的过表达或沉默株系，A的表达量...

跪求请问这段话描述的到底是相对定量pcr还是绝对定量pcr，在网上查了很多资料说相对的不需要标曲，想像他一样获得细胞中mRNA的含量完全不知道什么意思，不做这个相关的，只想要这一小部分数据，跪求回答，快毕业了好头疼。“通过测定controlRNA(在Rever...

最近开始铁死亡相关的研究。但是看到论文里的半胱氨酸饥饿处理，但是翻了好几篇论文也没看到相应的培养基货号，因此想问大家有知道不含半胱氨酸的细胞培养基是怎么配置的吗？还是有现成的培养基可以购买呢？

求赠求赠野生型酵母菌株INVSc1，可交换质粒或其他菌株。

跪求，会生信的私信我

在敲基因各种不顺利，生活也没有任何快乐而言啦

求毕赤酵母中文手册，万分感谢！

昨天我把三条单链放在10％FBS，37℃孵育了10h，拿出来跑结构胶(用的10xTAE，甘油上样缓冲液)，跑完一看，好家伙，几乎没有降解(分了5个时间节点，条带大小和颜色几乎没有区别)，有没有大佬知道什么原因的？孵育之前在-20℃保存，血清(4℃避光保存)还是...

准备构建一个融合蛋白，载体上面有个EGFP荧光标签，我想利用EGFP指示一下我的目的基因是否表达成功，因此想把EGFP与目的基因做成融合蛋白，把目的基因的终止密码子TAA删掉了，EGFP位于我的N端，要不要去掉它的起始密码子ATG？

求：酵母双杂中BD+AD-gene共转化在4缺板上没长，但是2缺板上菌落挑在4缺+x-gal变蓝，请问是什么原因呢？?

有在做幽门螺杆菌培养和分子鉴定的，可以多多交流。可以菌株资源互换[Lasteditedby51778on2021-3-24at10:07]

我是个分子生物学小白，想在短小芽孢杆菌中敲除一个基因，所以敲前的准备工作前想先问问虫友们，大家都在菌里试过啥敲除方法啊，哪种方法会相对来说好敲一些感谢感谢！

时间久了，morpholino会失效吗？之前注射MO的胚胎都有表型，时间长了以后再注射的时候发现表型不明显了

用试剂盒从总RNA中提取mRNA,提完以后测A260/280,结果也是1.8-2.0比较好吗？总RNAd的A260/280都是2.02，但提取完mRNA测结果四五次结果都是2.2左右呢？

求助：本人做的真菌，基因敲除后致病性下降，但是体外产孢能力和生长都变好，没怎么查到类似结果的文献，怎么解释这个现象呢

跑胶验证了提取的RNA没有问题，用试剂盒反转录，一批里面总有失败的，就很绝望。也不清楚到底是哪里出了问题