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重组酶酶活测定

作者 JH5HJ
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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使用pGEX-4T-1载体与我的目的基因重组,在大肠BL21中表达我的酶,破碎后去上清,测酶活,现象非常奇怪,上清与底物混合后不用反应就可以得到产物,而且灭活组是没有的,跑了SDS-PAGE在目的区太多杂蛋白无法区分,想问问大家这个上清中有没有可以某种物质可以与我的底物反应,而不是蛋白同时又可以降解我的底物

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  • 精华评论
  • pennchem

    这个问题的一个更好的对照是:表达空质粒,破菌离心后取上清做同样的实验。

  • pennchem

    如果大肠杆菌中也有同功能的酶,也是有可能的,看催化的是什么反应,如果是核酸酶,或者保守的代谢酶,可能性就大了,

  • pennchem

    质粒上也有蛋白的,如青霉素水解酶,如果表达的是内酰胺酶,然后不表达,也能降解你的产物,

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