使用pGEX-4T-1载体与我的目的基因重组,在大肠BL21中表达我的酶,破碎后去上清,测酶活,现象非常奇怪,上清与底物混合后不用反应就可以得到产物,而且灭活组是没有的,跑了SDS-PAGE在目的区太多杂蛋白无法区分,想问问大家这个上清中有没有可以某种物质可以与我的底物反应,而不是蛋白同时又可以降解我的底物 返回小木虫查看更多
这个问题的一个更好的对照是:表达空质粒,破菌离心后取上清做同样的实验。
如果大肠杆菌中也有同功能的酶,也是有可能的,看催化的是什么反应,如果是核酸酶,或者保守的代谢酶,可能性就大了,
质粒上也有蛋白的,如青霉素水解酶,如果表达的是内酰胺酶,然后不表达,也能降解你的产物,
这个问题的一个更好的对照是:表达空质粒,破菌离心后取上清做同样的实验。
如果大肠杆菌中也有同功能的酶,也是有可能的,看催化的是什么反应,如果是核酸酶,或者保守的代谢酶,可能性就大了,
质粒上也有蛋白的,如青霉素水解酶,如果表达的是内酰胺酶,然后不表达,也能降解你的产物,