请教各位虫友，野生枯草芽孢杆菌电转化一般用的都是下面这个方法吗？菌体的OD、菌体量，电转电压在什么范围最好？
一、        感受态制备
新鲜平板挑单菌落（小一点为好）接种于3ml LB液体培养基中，过夜培养12h；
2）取过夜培养物接入50ml LB+0.5M 山梨醇，37℃，200rpm培养至对数生长期OD600=0.85~0.95（控制好接种量，使接种完毕后培养基的OD≈0.2，大约3-4h）；枯草芽孢杆菌T0期（对数生长期末期到稳定期）形成感受态，
3）取全部菌液冰浴10 min，然后5000rpm，6min，4℃离心收集菌体；
4）用30ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油）重新吹悬菌体，5000rpm，8min，4℃离心去上清，如此漂洗4次；
5）将洗涤后的菌体吹悬于0.5 ml电转培养基中，分装60μl/ 管,直接电转化，或者于-80℃保藏。

二、电转化
1）将60μl感受态细胞中加入50ng质粒DNA（1~8μl），冰上孵育5min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。
(感受态细胞从-80冰箱拿出来后在冰上融化，DNA样品加入感受态也要在冰上完成，并且混合后立刻擦干电转)
电转仪设置：2.0kv（25μF 200Ω 1mm ）电击1次（时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率）
2）电击完毕取出杯子并立即加入（在酒精灯旁即可）1ml RM动作要轻柔（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，120rpm，复苏3h;
3）5000 rpm离心,5分钟,弃上清剩100ul， 涂板 37℃，过夜培养。 返回小木虫查看更多