找个几个合适的内切酶分别切一下再跑？

先做pcr验证是否存在该基因，然后根据酶切位点选择合适的内切酶，单酶切或者双酶切都可以。不过最可靠的就是测序了。

设计几对引物分别p下  有结果 建议直接做后续  测序挺慢的

检一下接头地方，如果都有的话，基本没问题。可以往下做，同时送测

直接PCR检测，引物分别设计在载体和插入片段上。
阳性克隆测序确定。