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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大分子片段如何跑胶（20-40kb）
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19910204

新虫 (小有名气)

[求助] 大分子片段如何跑胶（20-40kb） 已有4人参与

我的插入基因大小大概是20-40kb，现在想检测是否成功转入，一般的琼脂糖凝胶电泳好像无法检测分辨，请教大家有啥其他的好方法吗？谢啦。。。
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1楼 2017-01-18 18:53:50
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找个几个合适的内切酶分别切一下再跑？

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19910204
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
2楼2017-01-18 19:35:37
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-22 07:52:56
先做pcr验证是否存在该基因，然后根据酶切位点选择合适的内切酶，单酶切或者双酶切都可以。不过最可靠的就是测序了。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
3楼2017-01-18 20:03:24
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19910204

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-18 19:35:37
找个几个合适的内切酶分别切一下再跑？

酶切试过了，但是只跑出来一条10kb左右的带
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4楼2017-01-18 20:03:55
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 19910204 at 2017-01-18 20:03:55
酶切试过了，但是只跑出来一条10kb左右的带...

多用几种酶试试吧。一种酶切一次也不一定准。

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
5楼2017-01-18 20:20:43
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igoandsee

铜虫 (初入文坛)
设计几对引物分别p下  有结果 建议直接做后续  测序挺慢的

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6楼2017-01-19 09:13:55
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-22 07:53:48
检一下接头地方，如果都有的话，基本没问题。可以往下做，同时送测
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
7楼2017-01-19 12:16:21
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-22 07:53:27
直接PCR检测，引物分别设计在载体和插入片段上。
阳性克隆测序确定。
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8楼2017-01-21 21:58:42
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-21 21:58:42
直接PCR检测，引物分别设计在载体和插入片段上。
阳性克隆测序确定。

大片段容易出现中间缺失，一定要通测。
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9楼2017-01-21 21:59:50
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