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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr电泳后，切胶回收，回收的目的条带上边总有一条杂带，求大神指教
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr电泳后，切胶回收，回收的目的条带上边总有一条杂带，求大神指教 已有2人参与

pcr电泳后，使用的是大空的琼脂糖凝胶，上样量为25微升，4个空，点用后条带清晰，有一个距离目的条带较远的杂带，然后切胶回收，切胶时切胶完好，没有带入杂带，回收使用的是宝生物的盒子，但回收后再进行电泳检验是否回收到目的条带时，在目的条带上边总有一条杂带，求大神指教。

pcr电泳后，切胶回收，回收的目的条带上边总有一条杂带，求大神指教
2015-12-31.jpg
这个maker没了是点错了  点成buffer了。。。。但是可以看见比较亮的是目的条带，暗的是杂带。


pcr电泳后，切胶回收，回收的目的条带上边总有一条杂带，求大神指教-1
2015-12-31回收后跑胶.jpg
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1楼 2016-01-06 21:30:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xufengnbu at 2016-01-06 23:40:04
重复一次实验看看。pcr可以适当提高下退火温度，缩短延伸时间。切胶时候注意不要污染

实验已经重复做了好几次了，每次都是这样，退火温度已经摸索过了，这个是比较好的情况了，可是为什么回收后还会有两个条带呢
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4楼2016-01-07 08:30:12
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
苍蝇小田七: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2016-01-07 10:47:42
引用回帖:
7楼: Originally posted by 苍蝇小田七 at 2016-01-07 10:03:14
额，就是说，回收之后不管它呗，直接做后边的克隆就行了是吧...

对的，因为这已经是回收之后的了，而且你做了不止一次，好几次都是这样基本不是人为的问题的了。你可以尝试了做了看看，实验嘛，不做到最后谁也不知道是什么个情况。
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8楼2016-01-07 10:06:10
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普通回帖

xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重复一次实验看看。pcr可以适当提高下退火温度，缩短延伸时间。切胶时候注意不要污染

发自小木虫IOS客户端
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why is the way to success
2楼2016-01-06 23:40:04
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种现象我以前也有过，回收后有2条带，但是做了克隆之后发现，她就是一个片段。
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3楼2016-01-07 08:03:21
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by heianduck at 2016-01-07 08:03:21
这种现象我以前也有过，回收后有2条带，但是做了克隆之后发现，她就是一个片段。

对对对，我也是下一步要做克隆的，和载体链接然后导入感受态细胞对吧？
你的也是有两条带，那你是怎么解决的啊，还是没管它直接下一步了呢？请指教，谢谢！！！
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5楼2016-01-07 08:32:00
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 苍蝇小田七 at 2016-01-07 08:32:00
对对对，我也是下一步要做克隆的，和载体链接然后导入感受态细胞对吧？
你的也是有两条带，那你是怎么解决的啊，还是没管它直接下一步了呢？请指教，谢谢！！！...

我是没管他，我回收前还是单挑带，回收之后就是双条带了。我就直接做了，结果也都可以。
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6楼2016-01-07 09:51:14
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by heianduck at 2016-01-07 09:51:14
我是没管他，我回收前还是单挑带，回收之后就是双条带了。我就直接做了，结果也都可以。...

额，就是说，回收之后不管它呗，直接做后边的克隆就行了是吧
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7楼2016-01-07 10:03:14
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by heianduck at 2016-01-07 10:06:10
对的，因为这已经是回收之后的了，而且你做了不止一次，好几次都是这样基本不是人为的问题的了。你可以尝试了做了看看，实验嘛，不做到最后谁也不知道是什么个情况。...

好的，知道了，谢谢你，有问题还会麻烦你的 ，谢谢谢谢
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9楼2016-01-07 10:47:30
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heianduck

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 苍蝇小田七 at 2016-01-07 10:47:30
好的，知道了，谢谢你，有问题还会麻烦你的 ，谢谢谢谢...

呵呵，没问题，随时来问
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10楼2016-01-07 11:13:37
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