24小时热门版块排行榜    

查看: 3816  |  回复: 5

a50044758

银虫 (小有名气)

[求助] 提取基因组,跑胶条带漂移,每次跑胶条带大小都不一样。

最近跑DNA胶很邪门,首先是基因组DNA的条带大小在不同的胶里跑得不一样。做3C-
library,所以在提取的过程中没有除去蛋白质,用裂解液裂解细胞后,离心收集细胞
核,再分别用SDS和Triton X-100裂解细胞核后跑的琼脂糖胶。
提取基因组,跑胶条带漂移,每次跑胶条带大小都不一样。
其中2,3泳道是刚提取完时跑的电泳条带,1,4孔道是将同样的样品放置6个小时左右
后跑的电泳条带,结果条带大小就发生了改变,有15000bp左右减小到了几百bp,而且
每次跑胶,电泳条带的大小都不固定,大多都只有几百bp,和基因组大小不符!

然后是回收cDNA500-700bp的带加adapter,扩PCR也出现这种飘移现象。到别的lab也试
了,还是这样。跑别的特异PCR扩增和酶切质粒都是好好地。真是邪门了。

请大家分析下是什么原因造成的。谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
a50044758(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-15 11:16:44
会不会有没有除净的蛋白质,没变性的核酸酶降解了你的DNA??
我会绕一个圈,走回到实验室
2楼2013-07-15 08:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-15 08:58:35
会不会有没有除净的蛋白质,没变性的核酸酶降解了你的DNA??

降解的速度也太快了吧,才几个小时,而且我提取的基因组,同时跑两块胶,跑出的大小也不相同,实验卡在这里了,郁闷!
3楼2013-07-15 10:01:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
帮楼主顶起来,请高手指点,我也想知道,呵呵
4楼2013-07-15 12:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


a50044758: 金币+1, ★★★很有帮助, 我打算把试剂全部重新配一遍,谢谢了! 2013-07-18 22:37:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by a50044758 at 2013-07-15 10:01:27
降解的速度也太快了吧,才几个小时,而且我提取的基因组,同时跑两块胶,跑出的大小也不相同,实验卡在这里了,郁闷!...

同样的样品两块胶也不同???!!!会不会loading buffer啥的污染了。。。。。我也蒙圈了
我会绕一个圈,走回到实验室
5楼2013-07-16 14:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sungel

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
a50044758: 金币+1, 有帮助, 我打算把试剂全部重新配一遍,谢谢了! 2013-07-18 22:37:02
实验试剂污染了吧,或者是琼脂糖有问题?
6楼2013-07-16 16:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a50044758 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:53 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 13:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 3/150 2026-09-17 06:50 by k06BKNblrGRH
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-17 05:14 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-17 01:50 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 15:48 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-16 14:36 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:59 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
请填处理意见